Грамм палочки 2 в мазке что это: Исследование мазка

U (0-1), V(0-1-2),C (3-4). п…

  • Выберите клинику из списка

  • Все клиники

  • Гинекологическое отделение

  • Центр вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО)

  • Родовое отделение

  • Клиника педиатрии

  • Клиника терапии

  • Клиника стоматологии, имплантологии и челюстно-лицевой хирургии

  • Клиника кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии

  • Клиника неврологии и нейрохирургии

  • Клиника хирургии

  • Клиника травматологии и ортопедии

  • Клиника урологии

  • Клиника онкологии

  • Клиника оториноларингологии

  • Клиника офтальмологии и микрохирургии глаза

  • Клиника пластической и реконструктивной хирургии

  • Лабораторная служба

  •      Лаборатория медицинской генетики

  •      Клинико-диагностическая лаборатория

  • Клиника лучевой диагностики

  • Клиника восстановительного лечения

  • Медицинская помощь на дому

  • Анализ урогенитального мазка на микрофлору (на стекле)

    Анализ урогенитального мазка на микрофлору (на стекле)

    Анализ урогенитального мазка на микрофлору (на стекле)  — это исследование, которое  позволяет определить состав микрофлоры мочеполовых органов женщины (уретры, влагалища и цервикального канала) и мужчины, количество лейкоцитов, эпителия и их соотношение, количество слизи и морфологический тип бактерий, а также выявить ряд специфических возбудителей, таких как грибы рода Candida, трихомонады и гонококки. В состав нормальной микрофлоры мочеполовых органов женщины входит около 40 видов бактерий. Доминирующими микроорганизмами у женщин репродуктивного возраста являются молочнокислые бактерии (лактобактерии), которые составляют 95-98 % всей микрофлоры влагалища. Микроскопическое исследование мазка у женщин позволяет полуколичественно оценить общую микробную обсемененность, состояние эпителия влагалища, наличие и выраженность воспаления (по лейкоцитарной реакции), состав микрофлоры, а также выявить молочницу, трихомониаз и гонорею. Этот метод является «золотым стандартом» для диагностики бактериального вагиноза (чувствительность – 100 %). Норма мазка на флору определяется следующими показателями:
    должен присутствовать плоский эпителий, его отсутствие может быть связано с атрофией эпителиальных клеток, с недостатком эстрогенов или избытком мужских половых гормонов,
    количество лейкоцитов не должно превышать 15 в поле зрения, его увеличение указывает на воспалительный процесс, слизь, палочки (бациллы) в мазке составляют нормальную микрофлору влагалища, кокки и диплококки – выявление грамотрицательных диплококков в мазке свидетельствует о гонорее, «ключевые», или атипичные, клетки характерны для дисбактериоза влагалища, споры или мицелий грибов свидетельствует о кандидозе (молочнице), наличие подвижных бактерий в нативном мазке (трихомонад) характерно для трихомониаза,
    эритроциты выявляются при кровотечениях из матки, эрозиях или новообразованиях. Урогенитальный мазок у мужчин исследуют в основном для диагностики воспалительного процесса при уретритах различной этиологии (бактериальных уретритах, гонорее, трихомониазе, хламидиозе и др.). При исследовании отделяемого из уретры число и состав клеточных элементов зависят от остроты и продолжительности воспалительного процесса. Воспалительное состояние слизистой оболочки мочеиспускательного канала (уретры) выражается наличием в урогенитальном мазке более 4 сегментноядерных нейтрофилов (больше 4 лейкоцитов) в поле зрения. О глубине патологического процесса в уретре в мазке свидетельствует преобладание в препаратах цилиндрического и парабазального эпителия.

    Подготовка к исследованию

    В течение трех дней до планируемого исследования урогенитального мазка рекомендовано исключить местное применение антисептиков и/или других антибактериальных и противогрибковых препаратов. В течение трех часов до исследования удерживаться от мочеиспусканий, не проводить туалет наружных половых органов.
    Не рекомендованы половые контакты за 3 дня до планируемого исследования.
    Рекомендовано проводить анализ урогенитального мазка мужчины не ранее чем через две недели после приема антибактериальных препаратов.
    Женщинам рекомендуется сдавать анализ до менструации или через 2 дня после ее окончания.

    Показания к исследованию

    При симптомах дисбиоза или воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы.
    При профилактических осмотрах.
    Для диагностики бактериального вагиноза.
    Для выявления некоторых специфических инфекций, передающихся половым путем (кандидоза, трихомониаза, гонореи).

         

    Интерпретация









    Лейкоциты (v)

    0-10

    Эпителиальные клетки(V)

    5-10

    Микрофлора (V)

    Большое кол грамполож палочек Дедерлейна

    Гонококки (V)

    отсутствуют

    Трихомонады (V)

    отсутствуют

    Дрожжи (V)

    отсутствуют

    Ключевые клетки (V)

    отсутствуют

    Слизь (V)

    Умеренное количество

    На результаты могут влиять

    Местное применение антисептиков, антибактериальных, противогрибковых и противозачаточных препаратов.

    Назначается в комплексе с

    TORCH инфекции

    Микроскопическое исследование мазка из влагалища с окраской по Граму (с оценкой по шкале Ньюджента)

    Метод исследования

    Бактериоскопия окрашенного по Граму мазка из влагалища – это «золотой стандарт» диагностики бактериального вагиноза. Диагностика бактериального вагиноза основывается на наличии или отсутствии следующих признаков:

    • уменьшение количества или исчезновение лактобацилл – грамположительных палочек разной длины и толщины;
    • увеличение количества грамвариабельной (смешанной) кокко-бациллярной микрофлоры;
    • наличие ключевых клеток, которые представляют собой поверхностные клетки эпителия влагалища с адгезированными на них бактериями, за счет чего эпителиальная клетка имеет зернистый вид, а края таких клеток выглядят нечеткими.

    Для оценки результатов исследования препаратов, полученных из отделяемого влагалища и окрашенных по Граму, используется стандартная десятибалльная шкала (критерии Ньюджента). В основе лежит система баллов (очков) от 0 до 4 и их комбинация для диагностики и оценки степени бактериального вагиноза по оценке трех бактериальных морфологических типов (морфотипов) влагалища:

    А — Лактобациллы — большие грам-позитивные палочки (Lactobacillus acidophilus:large gram-positive rods)

    B — Вагинальная гарднерелла и бактероиды — мелкие грамвариабельные и грамотрицательные кокки (Gardnerella vaginalis and Bacteroides species :small gram-variable or gram-negative rods)

    C — Мобилункус — изогнутые грамвариабельные палочки (Mobiluncus species:curved gram-variable rods).

    Мазок из влагалища окрашивают по Граму и считают отдельно количество выявленных морфотипов под иммерсионной системой микроскопа в поле зрения:








    Баллы

    A Lactobacilli

    B Gardnerella

    C Mobiluncus
    0более 30 морфотиповнет морфотиповнет морфотипов
    15 — 30 морфотиповодин морфотиподин морфотип
    21-4 морфотипа1-4 морфотипа1-4 морфотипа
    3один морфотип5 — 30 морфотипов5 — 30 морфотипов
    4нет морфотиповболее 30 морфотиповболее 30 морфотипов

    Количество полученных баллов суммируют (A+B+C)

    • 0 — 3 балла — нормальная микрофлора
    • 4 — 6 баллов — промежуточная микрофлора
    • 7 — 10 баллов — бактериальный вагиноз.

    Микроскопическое исследование мазка из цервикального канала и отделяемого из влагалища является необходимым методом в скрининге и диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний женских половых путей (цервицит, вагинит), поскольку позволяет оценить степень воспалительного процесса (лейкоцитарную реакцию) и состояние микрофлоры, а также выявить элементы грибов рода Candida, трихомонады, внутриклеточные грам-отрицательные диплококки.

    Показания к исследованию:

    • Скрининговые исследования при профилактических осмотрах, диспансеризации, ведении беременности, перед проведением гинекологических операций;
    • Комплексная этиологическая диагностика патологических выделений из влагалища, клинических проявлений вагинита, цервицита; дифференциальная диагностика бактериального вагиноза;
    • Постлечебный мониторинг вагинита, цервицита, бактериального вагиноза..

    Мазок на флору: норма лейкоцитов

    Палочки Додерлейна. Что это такое?

    В норме в мазке женщины содержатся бактерии в форме палочек – это молочнокислые микроорганизмы. Высокое количество палочек в мазке свидетельствует о нормальном гормональном статусе и отсутствии воспаления.

    Эпителиальные клетки влагалища вырабатывают гликоген, который идет на питание палочек Додерлейна. При распаде гликогена выделяется молочная кислота, именно она создает кислую среду во влагалище. Это естественный защитный механизм, предохраняющий половые органы женщины от внедрения патогенных микроорганизмов.

    Если число палочек уменьшается, это говорит о сдвиге рН влагалища в щелочную сторону и возможном дисбактериозе.

    Золотистый стафилококк

    Кроме палочек, во влагалище присутствует небольшое количество другой флоры. Чаще всего встречается золотистый стафилококк. Если численность этих микроорганизмов не более 5%, волноваться не следует.

    В том случае, когда наблюдается увеличение стафилококка и уменьшение количества палочек Додерлейна, следует говорить о воспалении влагалища или цервикального канала.

    Клетки плоского эпителия, палочки Додерлейна, небольшое количество слизи и лейкоцитов свидетельствуют о нормальном гинекологическом мазке. Кроме того, в мазке должны отсутствовать гонококки, хламидии, гарднереллы, дрожжевые грибки.

    Другие обнаруженные элементы говорят о наличии какой-либо патологии половых органов.

    Кокковая флора

    Это бактерии, имеющие шаровидную форму. Небольшое количество кокков не опасно, но когда процент этих микроорганизмов превышает число молочнокислых палочек, это свидетельствует о снижении иммунитета или наличии воспаления. В мазке на флору вы можете встретить запись: Гр(+) или Гр(-).

    Все бактерии делятся на грамположительные и грамотрицательные организмы. Грамположительные микробы – это лактобациллы, энтерококки, стафило- и стрептококки. Грамотрицательные – гонококки, протей и кишечная палочка.

    Если в мазке обнаружены грамотрицательные кокки, расположенные внутри клеток, следует подумать о наличии гонореи.

    Гарднереллы

    Это очень мелкие палочки, появляющиеся при дисбиозе влагалища (бактериальном вагинозе). Являются возбудителями заболевания под названием «гарднереллез».

    Ключевые клетки

    Это плоский эпителий с сосредоточенными на его поверхности бактериями из разряда патогенной или условно-патогенной микрофлоры. Это клетки плоского эпителия, склеенные вместе с маленькими палочками. Наличие ключевых клеток в мазке из влагалища в большинстве случаев свидетельствует о развитии бактериального вагиноза (гарденереллеза), вызванного условно-патогенными бактериями со странным названием гарднереллы.

    Дрожжеподобные грибки

    Обнаружение спор и мицелия дрожжеподобных грибков бывает при молочнице – влагалищном кандидозе. О скрытом (спящем) кандидозе свидетельствуют споры грибков.

    Если иммунитет женщины нарушается, это приводит к активизации патогенной влагалищной микрофлоры, в том числе и грибка рода Кандида. При обострении молочницы в мазке встречаются нити мицелия Candida.

    Лептотрикс

    Это очень тонкая грамотрицательная бактерия, которая может быть обнаружена в мазке женщины. Лептотрикс не является возбудителем отдельного заболевания, однако, бактерия часто сопутствует другим инфекционным агентам. Например, лептотрикс находят при смешанной инфекции (трихомониазе, кандидозе, хламидиозе). Многие врачи считают наличие бактерии проявлением дисбактериоза.

    Трихомонады

    Это одноклеточные организмы, являются возбудителем заболевания «влагалищный трихомониаз».

    Если в мазке на флору выявлены грибки, ключевые клетки, кокки и лептотрикс, можно заподозрить влагалищный дисбиоз. Однако окончательный диагноз устанавливается врачом после проведения дополнительной диагностики.

    Дополнительное исследование

    ➤ Микробиоценоз влагалища и факторы, влияющие на его состояние


    1. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища, диагностика оппортунистических вагинитов. Медицинская технология. М.: ФГБУ «НЦ АГиП им. В.И. Кулакова» Минздравсоцразвития России, 2011. 


    2. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах: Учебное пособие. М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. 80 с. 


    3. Титова С.И., Гончарова Н.Г. Оценка клинической эффективности, безопасности и переносимости комбинации пребиотика и энтеросорбента в терапии бактериального вагиноза // Лечащий врач. 2008. №10. 


    4. Каминский В.В., Однокоз Т.А. и соавт. Сборник клинических исследований препаратов Лактофильтрум и Фильтрум. М., 2008. 


    5. Ворошилина Е.В., Тумбинская Л.В., Донников А.Е., Плотко Е.Э., Хаютин Л.В. Биоценоз влагалища с точки зрения количественной ПЦР: изменения и коррекция во время беременности // Инфекции в гинекологии. 2010. Т. 68. №3. С. 108–111. 


    6. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. М.: ООО «Нева-Люкс», 2001. 364 c. 


    7. Липова Е.В., Болдырева М.Н., Трофимов Д.Ю., Витвицкая Ю.Г. Урогенитальные инфекции, обусловленные условно-патогенной биотой у женщин репродуктивного возраста (клинико-лабораторная диагностика) // Пособие для врачей. М., 2009. С. 30. 


    8. Плотко Е.Э., Донников А.Е., Ворошилина Е.С., Хаютин Л.В., Тумбинская Л.В. Биоценоз влагалища с точки зрения количественной ПЦР: что есть норма? // Акушерство и гинекология. 2011. №1. С. 66–70. 


    9. Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Вульвовагинальный кандидоз. Клиника, диагностика, принципы терапии. М.: ООО «ГЭОТАР-Медиа», 2010. 80 c. 


    10. Радзинский В.Е., Ордиянц И.М. Профилактика послеродовых инфекций у женщин с бактериальным вагинозом // Гинекология. 2006. Т.8. №1. С. 14–16. 


    8. Сидорова И.С. Микробиоценоз половых путей женщин репродуктивного возраста // Акушерство и гинекология. 2005. №2. С. 7–9. 


    9. Malazy O.T., Shariat M., Heshmat R., Majlesi F. et al. Vulvovaginal candidiasis and its related factors in diabetic women // Taiwan J Obstet Gynecol. 2007, 46(4): 399–404. 


    10. Anderson B.L., Cu-Uvin S., Raker C.A. et al. Subtle perturbations of genital microflora alter mucosal immunity among low-risk pregnant women // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2011. Vol. 90, №5. P. 510. 


    11. Blum S., Schiffrin E.J. Intestinal microflora and homeostasis of the mucosal immune response: implications for probiotic bacteria? // Current issues in intestinal microbiology. 2003. Vol. 4, №2. P. 53–60. 


    12. Bradshaw C.S., Tabrizi S.N., Fairley C.K. et al. The association of Atopobium vaginae and Gardnerella vaginalis with bacterial vaginosis and recurrence after oral metronidazole therapy // The Journal of infectious diseases. 2006. Vol. 194, №6. P. 828–836. 


    13. Donders G.G., Bellen G., Mendling W. Management of recurrent vulvo-vaginal candidosis as a chronic illness // Gynecologic and obstetric investigation. 2010. Vol. 70, №4. P. 306–321. 


    14. Krauss-Silva L., Moreira M.E., Alves M.B. et al. Randomized controlled trial of probiotics for the prevention of spontaneous preterm delivery associated with intrauterine infection: study protocol // Reproductive health. 2010. Vol. 7. P. 14. 


    15. Levison M.E., Corman L.C., Carrington E.R., Kaye D. Quantitative microflora of the vagina // American journal of obstetrics and gynecology. 1977. Vol.127, №1. P. 80–85. 


    16. Linhares I.M., Giraldo P.C., Baracat E.C. New findings about vaginal bacterial flora // Revista da Associacao Medica Brasileira. 2010. Vol.56, №3. P. 370–374. 


    17. Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation. // Journal of clinical microbiology.-1991.- Vol.29, № 2.- P. 297-301. 


    18. Orendi J.M., Coetzee N., Ellington M. J. et al. Community and nosocomial transmission of Panton-Valentine leucocidin-positive community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus: implications for healthcare. // The Journal of hospital infection.-2010.- Vol.75, № 4.- P. 258-264. 


    19. Roberts C.L., Morris J.M., Rickard K.R. et al. Protocol for a randomised controlled trial of treatment of asymptomatic candidiasis for the prevention of preterm birth. // BMC pregnancy and childbirth.-2011.- Vol. 11.- P. 19. 


    20. Sherrard J., Donders G., White D., Jensen J.S. European (IUSTI/WHO) guideline on the management of vaginal discharge, 2011. // International journal of STD & AIDS.-2011.- Vol.22, № 8.- P. 421-429. 


    21. Verhelst R., Verstraelen H., Claeys G. et al. Cloning of 16S rRNA genes amplified from normal and disturbed vaginal microflora suggests a strong association between Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis and bacterial vaginosis. // BMC microbiology.-2004.- Vol.4.- P. 16. 


    22. Zodzika J., Rezeberga D., Jermakova I. et al. Factors related to elevated vaginal pH in the first trimester of pregnancy. // Acta obstetricia et gynecologica Scandinavica. 2011. Vol. 90, №1. P. 41–46.

    Гинекологический мазок в Санкт-Петербурге, цена услуги в Выборгском районе

    Эта процедура является разновидностью исследования выделений из влагалища с целью диагностики. Во время посещения гинеколога обычно берется мазок на степень чистоты и флору. Это простой способ обнаружить болезнетворные микроорганизмы, которые вызывают молочницу, бактериальный вагиноз, вагинит и пр.

    Мазок на флору берут:

    • если есть выделения из влагалища;
    • если беспокоят боли внизу живота;
    • если ощущается зуд или жжение во влагалище;
    • если длительно принимались антибиотики;
    • если планируется беременность;
    • если идет профилактический осмотр и пр.

    Как подготовиться к сдаче мазка?

    За день-два до планируемого взятия мазка наши гинекологи рекомендуют исключить спринцевания и половые контакты, а также применение лубрикантов, вагинальных таблеток, кремов и свечей. Мазок не сдают во время менструации, поскольку выделения искажают общую картину. Пару часов до планируемого похода к врачу не следует мочиться. Обмывание половых органов накануне визита к гинекологу проводить теплой водой без мыла.

    Мазок лучше всего сдавать в первые два-три дня после менструации или перед началом следующего цикла.

    Как расшифровать мазок?

    В результате лабораторного исследования вашего мазка на флору могут указываться такие данные:

    Лейкоциты. Они должны присутствовать лишь в малых количествах. Норма содержания их во влагалище и мочеиспускательном канале – до 10 в поле зрения, и не больше 30 – в шейке матки. Повышение в мазке количества лейкоцитов говорит о том, что присутствует воспалительный процесс.

    Несколько повышается норма их содержания в мазке при беременности – 20-30 в поле зрения.

    Слизь. В норме она содержится в мазке в умеренном количестве, так как вырабатывается железами влагалища и цервикального канала.

    Плоский эпителий. Эти клетки выстилают поверхность слизистой канала шейки матки, влагалища. Количество их зависит от фазы менструального цикла. Норма плоского эпителия в мазке – 5-10 клеток. Если он вообще не обнаружен, это может говорить об атрофии эпителиального слоя, а если количество клеток плоского эпителия повышено – о воспалении.

    «Ключевые клетки». Это клетки плоского эпителия, покрытые гарднереллой (бактериями). Большое количество их в мазке указывает на гарднереллез.

    Лактобациллы (палочки Додерлейна). Нормой является присутствие их в микрофлоре влагалища в большом количестве. Снижение их содержания говорит о бактериальном вагинозе.

    Дрожжи. Они входят в небольшом количестве в состав микрофлоры влагалища, но их повышение более 104 КОЕ/мл, особенно на фоне творожистых выделений и зуда во влагалище – признак молочницы.

    Лептотрикс. Эти анаэробные грамотрицательные бактерии встречаются при смешанных половых инфекциях (например, кандидоз и бактериальный вагиноз, трихомониаз и хламидиоз). Выявление их в мазке на флору предполагает назначение серьезного обследования.

    Мобилункус. Анаэробный микроорганизм, который встречается у женщин с бактериальным вагинозом либо кандидозом.

    Трихомонада. Это простейший одноклеточный микроорганизм, который в мочеполовой сфере вызывает воспалительные процессы.

    Гонококки (диплококки). Это возбудитель гонореи. В норме они не должны обнаруживаться в мазке.

    Кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки). Это условно патогенные микроорганизмы. В малом количестве они входят в нормальный состав флоры, а их увеличение говорит о наличии инфекции.

    Кишечная палочка. Она должна присутствовать в норме в мазке только в малых количествах. Содержание в мазке кишечной палочки в большом количестве говорит о бактериальном вагинозе или попадании в мазок кала.

    Буквами обозначаются зоны, откуда берут мазки: буквой «U» обозначается мочеиспускательный канал, «C» — шейка матки и «V» — влагалище.

    На основе значения всех этих показателей определяют степень чистоты влагалища, отражающую состояние микрофлоры в целом.

    Выделяют степени чистоты влагалища:

    1. Микрофлора влагалища в оптимальном состоянии. Характерна для женщин условно здоровых (крайне редко встречается).
    2. Отклонения микрофлоры незначительные. Наиболее распространена у условно здоровых женщин.
    3. Отклонения от нормы (большое количество грибов, условно-патогенных бактерий). Эта степень указывает на присутствие воспалительного процесса.
    4. Отклонения от нормы значительные. Говорит о бактериальном вагинозе и прочих половых инфекциях.

    Гинекологический мазок – это предварительная ступень в диагностике заболеваний. Если в нем обнаружены отклонения, врач нашей клиники может назначить вам как повторный анализ, включающий в себя бакпосев и информацию на чувствительность к антибиотикам, так и диагностику методом ПЦР, выявляющем скрытые инфекции половой сферы.

    Гинекологический мазок вы можете сделать в нашей клинике в Выборгском районе города, у метро Проспект Просвещения.

    Смотрите также: Диагностика бесплодия, Лечение бесплодия, Прием врача гинеколога, Диагностика и лечение ИППП.

    Кто-кто в организме живет?

    Микробиологический мазок

    Микрофлорой называют весь спектр полезных и болезнетворных микробов какого-либо органа. Естественная здоровая среда женских половых органов представлена преимущественно лактобациллами, поддерживающими во влагалище кислую среду, которая препятствует размножению болезнетворных микробов. Нарушение микрофлоры-защитницы приводит к таким заболеваниям, как бактериальный вагиноз, молочница, вагинит, и прежде чем назначить лечение, специалисту необходимо знать, с чем же он имеет дело.

    Мазок на флору (иногда используют термины общий мазок, или бактериоскопия) – это лабораторное микроскопическое исследование, позволяющее определить характер микрофлоры влагалища, канала шейки матки или уретры (мочеиспускательного канала).

    Мазок на микрофлору производится с целью диагностики и профилактики воспалительных заболеваний женской половой сферы и в диагностических целях, если женщина испытывает боль или чувство дискомфорта внизу живота, если появляются подозрительные выделения из половых органов или беспокоит зуд в этой области.

    «Мазок на флору, – говорит Ольга Семенова, – я рекомендую обязательно делать женщинам, которые планируют беременность, а также тем, кто прошел длительное лечение антибиотиками или лекарствами, снижающими иммунитет (кортикостероиды, противоопухолевые средства и подобные им препараты). Это исследование необходимо проводить регулярно: если женщину ничего не беспокоит – раз в полгода. Если вы собираетесь пройти исследования на микрофлору, то за сутки до проведения процедуры должны воздержаться от половых контактов, спринцевания и применения любых вагинальных препаратов (кремов, свечей). За 2–3 часа перед взятием соскоба для исследования не рекомендуется мочиться, в противном случае придется проходить все по-новой, ибо полученные результаты окажутся недостоверными».

    Процедура взятия мазка на флору, может, конечно, вызвать некоторый кратковременный дискомфорт, но практически безболезненна, производится она одноразовым шпателем.

    После осуществления соскоба со слизистой оболочки полученный материал наносят на предметное стекло и отправляют в лабораторию. Там его окрашивают специальными красителями, а затем изучают под микроскопом. Каждой пробе присваивается свой буквенный код: «V», если мазок взят из вагины (лат. vagina), «С» – из матки (cervix), «U» – уретры (uretra).

    Что ищут и что находят

    В мазке на флору обнаруживаются клетки плоского эпителия, выстилающего внутреннюю поверхность влагалища и шейки матки. В норме количество эпителия в мазке зависит от фазы менструального цикла женщины. Наличие большого количества плоского эпителия в мазке указывает на наличие воспалительного процесса: вагинита (воспаление влагалища), цервицита (воспаление канала шейки матки), уретрита (воспаление мочеиспускательного канала). Отсутствие эпителия в мазке говорит о нарушении гормонального фона (недостаточность женских половых гормонов).

    Лейкоциты – клетки, участвующие в уничтожении болезнетворных бактерий, также присутствуют в мазке: не более 10 в пробе «V» и не более 30 в пробе «С». Повышенное содержание лейкоцитов в мазке говорит о возможном воспалении.

    В норме в мазке присутствует большое количество грам-положительных палочек, например, лактобацилл Додерлейна, которые составляют нормальную микрофлору влагалища. Снижение количества лактобактерий является одним из признаков бактериального вагиноза, или гарднереллеза, при котором лактофлора заменяется на полимикробные ассоциации анаэробов и гарднереллы. При этом появляются выделения с неприятным рыбным запахом, наблюдается минимальная воспалительная реакция слизистой.

    В мазке могут содержаться и другие, болезнетворные микроорганизмы: трихомонада (trihomonas vaginalis – возбудитель урогенитального трихомониаза), кандида (candida – дрожжеподобный грибок, возбудитель молочницы), гонококки (палочки Нейссера – возбудитель гонореи) и другие.

    Чистота – залог здоровья

    Набор микроорганизмов по результатам исследований, как правило, оказывается разным у разных людей и совершенно отличным даже у одного и того же человека в разные периоды. В микрофлоре могут преобладать либо полезные, либо вредоносные бактерии, и по соотношению тех или иных врачи говорят о степени чистоты влагалища, различая 4 его степени.

    Ждем рождения ребенка…

    Риск возникновения различных воспалительных заболеваний влагалища особенно велик во время беременности, прежде всего, из-за изменения гормонального фона, в процессе происходящей перестройки организма женщины к новому состоянию. И здесь без мазка не обойтись: наличие воспалительного процесса в родовых путях грозит прерыванием беременности, преждевременными родами и возможным инфицированием ребенка при родах.

    «Беременной женщине рекомендуется сдавать мазок на флору как минимум 3 раза в течение беременности: при первом обращении к врачу, на сроке беременности в 30 недель и на 36–37-й неделях, – говорит Ольга Викторовна. – При этом могут понадобиться дополнительные исследования мазка на флору: при жалобах на зуд, жжение в области половых органов, при появлении неприятного запаха или изменении цвета выделений и их количества». Расшифровка мазка на флору при беременности осуществляется по тем же параметрам, что и у небеременных женщин. Во время беременности допустимо некоторое превышение содержания лейкоцитов в мазке (до 15–20).

    Цитологический мазок

    Мазок на цитологию, или, по-другому, мазок по Папаниколау, Пап-тест, мазок на атипичные клетки – это лабораторное микроскопическое исследование, которое осуществляется с целью ранней диагностики рака шейки матки. В мазке на цитологию оцениваются размер, количество, форма и расположение клеток шейки матки, что позволяет выявлять предраковые и раковые заболевания этого органа.

    Расшифрованный цито

    В зависимости от полученных результатов исследования выделяют 5 классов состояния шейки матки:

    1. Все клетки соскоба имеют нормальный размер, форму, расположение.

    2. Отмечается при воспалении половых органов – кольпите или цервиците.

    3. В мазке имеются отдельные единичные подозрительные клетки. В данном случае необходимо дополнительное исследование шейки матки (повторная цитология или биопсия шейки матки – взятие участка шейки матки для исследования под микроскопом).

    4. В мазке обнаружено небольшое количество раковых клеток.

    5. В мазке присутствует большое количество раковых клеток: имеется высокая вероятность рака шейки матки.

    Как отмечает Ольга Семенова, взятие мазка на микрофлору или цито – это только предварительное исследование. Некоторые вирусы, хламидии, уреаплазмы и микоплазмы из-за их маленьких размеров невозможно определить в мазке. Для этого берется кровь на ПЦР (полимеразно-цепную реакцию), чтобы выявить ДНК возбудителя инфекции.

    Для специалиста работа только начинается: необходимо вычислить возбудителя, определить его чувствительность к антибиотикам, назначить соответствующее лечение.

    Что делает ацетоновый спирт с пятном по грамму?

    Окрашивание по Граму — это процедура дифференциального окрашивания, которая показывает, какие бактерии являются грамположительными или грамотрицательными в зависимости от их цвета окраски. Ацетоновый спирт — один из реагентов, используемых в этом процессе для обеспечения цветовой дифференциации. Грамположительные бактерии имеют толстый пептидогликановый слой и окрашиваются в фиолетовый цвет, в то время как грамотрицательные микроорганизмы практически не имеют пептидогликанового слоя и окрашиваются в розовый цвет.

    Первичное окрашивание — кристаллический фиолетовый

    После приготовления слайда с бактериальным образцом сначала используют кристаллический фиолетовый для окрашивания образца.На этом этапе грамположительные и грамотрицательные бактерии станут фиолетовыми. Обычно кристаллический фиолетовый наносят на предметное стекло на 30 секунд, прежде чем смыть водой излишки пятна. Кристаллический фиолетовый может немного прилипать к слоям пептидогликана, поэтому не все первичные пятна будут смыты водой.

    Протравливающий йод

    Затем к образцу добавляют йод на одну минуту. Он действует как протрава, фиксирующая красители в процессе окрашивания. Йод выполняет эту функцию, связываясь с кристаллическим фиолетовым и создавая нерастворимый комплекс, который гораздо лучше прилипает к толстому слою пептидогликана, обнаруженному в грамположительных бактериальных клетках, чем просто к кристаллическому фиолетовому.После добавления йода промывка водой не выполняется.

    Спирт для обесцвечивания

    В качестве обесцвечивающего агента можно использовать ацетон или этиловый спирт. Спирт растворяет липиды, обнаруженные во внешней клеточной мембране грамотрицательных бактерий, позволяя комплексу кристаллического фиолетового и йода вытекать из более тонкого слоя пептидогликана. Спирт добавляется от 10 до 20 секунд; его выливают на предметное стекло до тех пор, пока весь йод не будет смыт и стоки не станут бесцветными. На этом этапе процесса окрашивания по Граму грамотрицательные бактерии бесцветны, в то время как грамположительные бактерии все еще сохраняют кристаллический фиолетовый цвет. После завершения слайд необходимо промыть водой, чтобы остановить обесцвечивание.

    Контрастное пятно-сафранин

    Затем добавляется сафранин для увеличения видимости и контраста с бесцветными грамотрицательными бактериями. Пятно заставляет эти бактерии казаться розовыми под микроскопом. Поскольку краситель добавляется ко всему образцу, он также окрашивает грамположительные бактерии, но более темный цвет кристаллического фиолетового скрывает более светлый розовый цвет сафранина.После того, как образец предметного стекла был залит сафранином в течение примерно минуты, воду используют для смывания лишних пятен, которые не прилипли к бактериальным клеткам.

    Дифференциальные окрашивания для идентификации бактерий: по Граму, кислотоустойчивые и эндоспорые

    Грамм, кислотоустойчивые и эндоспоровые бактериальные пятна — P2

    Карболфухсин Циля, первичное окрашивание, используемое для кислотостойкого окрашивания наносится на предметное стекло бактериального мазка, покрытое промокательной бумагой, на водяной бане.

    Кислотно-быстрое окрашивание

    Во время метода кислотостойкого окрашивания на бактериальный мазок помещают слайд-лист промокательной бумаги, затем на промокательную бумагу наносят ярко-розовый краситель (карболфуксин Циля) и предметное стекло и бумагу помещают на водяную баню (дымящуюся кастрюлю с водой, накрытую сеткой) на 3-5 минут.

    Страница последнее обновление 3/2016

    Фотошаблоны для дифференциальных пятен

    уже в продаже!

    СТРАНИЦА 2 < Вернуться на страницу 1

    Продолжение…

    Пятно от эндоспор

    Виртуальный класс микробиологии предоставляет широкий спектр БЕСПЛАТНЫХ образовательных ресурсов, включая лекции в PowerPoint, учебные пособия, контрольные вопросы и практические контрольные вопросы.

    SPO VIDEO :

    Как сделать кислотостойкое пятно

    Что кислотостойкое пятно показывает о бактериях

    Кислотостойкое окрашивание, также известное как окраска Циля Нильсена, используется для идентификации специализированных бактерий, у которых есть восковая миколиновая кислота в их клеточной стенке.Миколиновая кислота присутствует в бактериях редко, только у двух родов: Mycobacteria

    и Nocardia. Бактерии, содержащие миколиновую кислоту, считаются «кислотоустойчивыми», тогда как подавляющее большинство бактерий, не имеющих клеточных стенок, содержащих миколиновую кислоту, считаются «некислотными».

    ЗАМЕТКИ КЛАССА

    из бесплатного образовательного сайта STEM

    Восковые кислотостойкие клетки окрашиваются в ярко-розовый цвет и слипаются, слипаясь.Невоскообразное (не кислотостойкое) пятно темно-пурпурного цвета. Бактерии просматриваются при 1000xTM.

    После завершения этого шага промокательная бумага выбрасывается, а предметное стекло ополаскивается. Затем применяется обесцвечивающее средство, кислотный спирт, чтобы удалить пятно с некислотных быстрых клеток. Наконец, наносится пурпурное контркрашивание (кристаллический фиолетовый) и предметное стекло ополаскивается.

    После этой процедуры окрашивания кислотоустойчивые (восковидные) бактериальные клетки становятся ярко-розовыми, а некислотные (не восковидные) бактериальные клетки — пурпурно-синими.

    В этой статье

    3 страницы:

    Mycobacterium leprae

    Бактерии для окрашивания и культивирования

    Самые распространенные пятна

    Простое пятно

    Краска по грамму

    Поскольку бактерии маленькие, прозрачные и
    бесцветные, их часто невозможно увидеть под
    микроскоп без какого-либо пятна. Пятно — отличный способ
    раскрасьте бактерии, чтобы их было легче увидеть, а также
    выявление и организация его. Есть 2 основных типа пятен
    с бактериями можно поступить — и простое пятно, и пятно по Граму.

    В простом пятне вы хотите размножить бактерии
    на предметное стекло, используя правильную технику мазка. Это обеспечит
    что у вас тонкий слой и только небольшое количество, иначе
    будет очень сложно найти под микроскопом.Далее вы
    окрашивает бактерии в цвет. Обычные пятна включают метилен.
    синий, кристально-фиолетовый и основной фуксин. Пятна имеют особые
    клетки, называемые хромофорами, которые содержат цветные ионы и имеют тенденцию
    быть немного позитивным. Бактерии имеют тенденцию быть немного отрицательными,
    так что два притягиваются, что позволяет пятну прилипать к
    бактерии. Это пятно используется в основном для просмотра организмов.
    лучше.

    Напротив, вы также можете использовать окраску по Граму.Кристиан Грам создал пятно по Граму в 1884 году, и оно было
    используется с тех пор. Окрашивание по Граму разделяет организмы на две части.
    категории — грамположительные или грамотрицательные. Грамм положительной воли
    станет пурпурным или синим, а грамотрицательный —
    розовый или красный цвет. Кристаллический фиолетовый краситель используется для окрашивания
    организмов, и вы можете найти основные характеристики
    организм в зависимости от цвета получается. Главное отличие
    между двумя группами зависит от их клеточных стенок
    состоит из.Клеточная стенка грамположительных бактерий состоит из
    пептидогликан, в то время как грамотрицательные бактерии имеют клеточную стенку
    состоит из полисахаридов и липидов. Пока это пятно
    хороший начальный шаг в организации и размещении бактерий в
    группы, это не всегда работает. Есть несколько бактерий, которые
    может окрашивать как негатив, так и позитив, а другие нет
    пятно вообще.

    Как видно из этих фотографий, грамм
    отрицательные бактерии станут красными (справа) и грамположительными
    бактерии станут синими или фиолетовыми (слева. )

    Mycobacterium leprae
    грамположительные бактерии. Они будут похожи
    к фото слева.

    Выезд
    как бактерии могут повлиять на ВАС!

    ветеринарных паразитов

    ветеринарных паразитов

    Ред.
    30.10.2019

    Вернуться в меню методов

    Сбор проб

    1. Кал
      • Собирать свежие фекалии (для крупных животных ректально) без мусора,
        возможно
      • Хранить в холодильнике в чистом сухом контейнере с герметичной крышкой
      • .

      • Если кал диареи, осмотрите как можно скорее после сбора и выполните
        не охлаждать
    2. Кровь
      • Кровь можно собрать для мазка с помощью обычного шприца и иглы или
        пробирка с ЭДТА
      • Избегайте ненужного перемешивания, чтобы уменьшить гемолиз образца
      • Если кровь должна быть отправлена ​​в лабораторию для серологического анализа, обратитесь в лабораторию.
        какие образцы нужны

    Сбор кишечных паразитов

    1.Прямой мазок кала

    Очень хороший метод идентификации подвижных паразитов, обычно используемых
    для диарейных или слизистых фекалий. Используйте как можно более свежие фекалии.

    1. Поместите каплю физиологического раствора на чистое предметное стекло
    2. Возьмите ректальный образец кала пальцем в перчатке (или
      пальцем или зубочисткой на свежий уже собранный образец)
    3. Очень тонко намажьте чистое предметное стекло и накройте покровным стеклом
    4. Можно использовать красители, такие как Циль-Нильсен, карбол-фуксин или Гимза.
      (необязательно — в частной ветеринарной практике часто не используется)
    5. Используйте меньше света на микроскоп для исследования из-за четкого цвета
      самые неокрашенные паразиты

    Отрицательные результаты неубедительны, выполните методику концентрации, например
    как флотация на всех образцах с отрицательными результатами прямого мазка.

    Убедитесь, что образец на слайде очень тонкий (вы сможете
    читать отпечаток через образец), если фекальный слой слишком толстый, он становится
    сложно определить перемещение паразитов.

    2. Флотационные жидкости

    Поскольку яйца паразитов тонут в воде, для
    сконцентрировать и отделить яйца от большинства фекальных остатков.

    Наиболее часто используемыми жидкостями для флотации являются сульфат магния (Epsom
    соли), сахар, нитрат натрия и сульфат цинка.Удельный вес от 1,2
    до 1,3 лучше всего подходит для большинства яиц.

    У каждого решения есть свои преимущества и недостатки. Сульфат магния
    недорого, но если слайдам нужно немного постоять перед чтением, жидкость
    кристаллизуются, и яйца могут деформироваться. Раствор сахара позволяет слайдам быть
    хранятся дольше перед чтением, но липкие и могут быть более дорогими.
    Нитрат натрия можно купить уже в растворе, что экономит время.
    используется для смешивания, но стоит относительно дорого.Сульфат цинка лучший
    раствор для обнаружения цист лямблий, потому что цисты
    не искажаться так быстро с ним.

    Для приготовления флотационных жидкостей:

      • Для раствора сульфата магния пр. Гр. 1.2:
        • 8 литров воды
        • 10 фунтов английской соли
      • Для сахарного раствора пр. Гр. 1.27:
        • 454 г (один фунт) сахарного песка
        • 355 мл воды (1 стакан)
        • 6 мл 40% формальдегида (1 ч.)
        • Растворить в пароварке на нагревателе, затем добавить формальдегид
      • Для раствора сульфата цинка пр. Гр. 1.18:
        • 336 г ZnSO 4 7H 2
          O
        • 1000 мл дистиллированной воды

      3. Центрифугирование с флотационной жидкостью на основе сульфата магния

      Использование центрифуги снижает количество медленно поднимающихся яиц до
      поверхность флотационной установки. Таким образом уменьшается количество ложноотрицательных фекалий.
      экзамены.

      Используется для концентрирования цист простейших, нематод, цестод и некоторых других
      яйца членистоногих. (Обычно не используется для яйца с крышечкой)

      Материалы

        • Центрифужная пробирка (12 мл или 15 мл) с плоским верхом
        • Центрифуга
        • Аппликаторные стержни
        • Маленькие бумажные стаканчики
        • Марля
        • Вода
        • Флотационная жидкость (сахар или раствор MgSO 4 )
        • Квадратные покровные стекла (желательно пластиковые)

        Процедура

          • В центрифужной пробирке смешайте небольшое количество фекалий (около 1 ч.) с
            достаточно воды, чтобы размягчить и хорошо перемешать.
          • Добавьте флотационный раствор для получения небольшого обратного мениска. Поместите
            покровное стекло сверху.
          • Центрифуга 3-5 минут на 3 скорости.
          • Снимите покровное стекло, поместите его на предметное стекло и осмотрите
            микроскопически.
          • Мытье использованного одноразового оборудования

          Примечание: для травоядных или других фекалий с большим количеством мусора (например, кошачьих фекалий
          с приставшей подстилкой), процедите кал, смешав с небольшим количеством воды в бумаге
          чашки, добавьте MgSO 4 , перемешайте, перелейте через марлю в другую чашку или
          центрифужная пробирка, затем действуйте, как указано выше.

          4. Модифицированная Висконсинская процедура

          (для крупного рогатого скота, лошадей, собак, кошек и свиней)

          • Используется для количественного определения количества паразитов в отдельном животном.

          Модифицированная Висконсинская процедура подсчета яиц методом флотации
          используется для количественного определения количества паразитов в отдельном животном (крупный рогатый скот,
          лошади, собаки, кошки, свиньи)

          1. Взвесьте образец фекалий 2 г (5 г для коров) в бумажном стаканчике
          2. Налейте 10 мл воды в бумажный стаканчик с фекалиями.
          3. Очень хорошо перемешайте лопаткой и разомните материал до тех пор, пока он не станет однородным.
            полностью разобран
          4. Вылейте смесь через марлю или ситечко (пока она хорошо перемешана).
            ) в другую чашку, помешивая материал в сетчатом фильтре во время заливки.
          5. С помощью шпателя надавите на оставшийся в сетчатом фильтре материал до тех пор, пока
            почти сухая
          6. Добавьте небольшое количество воды в только что опорожненный бумажный стаканчик и смойте его.
            смесью материал прилипает к бокам и дну, а затем вылейте это
            смесь через материал в сетчатом фильтре, перемешивая материал в
            ситечко во время заливки.
          7. Вдавите материал в сетчатый фильтр, пока он снова не высохнет, а затем выбросьте.
          8. Перемешайте материал в чашке, которая находилась под сетчатым фильтром, и
            немедленно перелить содержимое чашки в одну пробирку на 15 мл. Если
            пробирка не слишком полна, спрысните воду по стенкам чашки в достаточном количестве.
            количества, чтобы удалить прилипший к нему материал и завершить заполнение
            трубка.
          9. Центрифугируйте пробирку при 1500 об / мин в течение 10 минут (не включая время
            требуется для разгона и замедления)
          10. Слейте воду из трубки, стараясь не слить мелкий материал из
            верхняя часть осадка
          11. Заполните трубку MgSO 4 , (пр.гр. 1.2-1.25) и перемешайте
            осадок и раствор MgSO 4 с помощью палочки-аппликатора,
            будьте осторожны, чтобы соскрести стенки и дно трубки, чтобы застраховать
            удаление и смешивание всего материала.
          12. Завершить заполнение трубки флотационной жидкостью
          13. С помощью капельницы добавьте в пробирку MgSO 4 до тех пор, пока он не станет
            достаточно полной, чтобы сверху можно было разместить квадратное покровное стекло размером 22 мм.
            (под покровным стеклом не должно быть пузырьков воздуха,
            перетекание материала по стенке трубы)
          14. Центрифуга при 1500 об / мин в течение 10 минут (не включая время, необходимое для
            ускорение и замедление)
          15. Снимите покровное стекло, подняв его прямо вверх, и поместите его на стекло.
            горка.Если все сделано правильно, под
            покровное стекло.
          16. Подсчитайте все яйца червя под всем покровным стеклом, используя низкий
            мощность (10х) объектив.
          17. Очень тщательно запишите результаты, указав (а) номер образца, (б)
            дата сбора, (c) количество обнаруженных яиц червей каждого типа

          Подсчет — это количество яиц на 2 (или 5) граммов фекалий.

          5. Значение яиц на грамм

          1. На количество яиц паразитов на грамм фекалий влияют:
            • Консистенция кала, чем суше кал, тем более концентрированный
              яйца паразитов в кале
            • Всего произведено фекалий
            • время суток собрано фекалий
          2. Значительное количество яиц паразитов варьируется в зависимости от вида хозяина и
            Типы паразитов:

            • При паразитизме нематод:
              • Лошади
                • 500 EPG = легкая инфекция
                • 800-1000 EPG = умеренная инфекция
                • 1500-2000 = тяжелая инфекция
              • Крупный рогатый скот
                • 300-600 EPG требует лечения
              • Ягнята зависят от вида паразитов, но обычно:
                • 1000 = умеренная, требует лечения
                • 2000-6000 = тяжелая
            • Для трематодного паразитизма (т.е. Fasciola hepatica)
              • КРС 100-200 EPG считается патогенным
              • Овцы 300-600 EPG считаются патогенными

          6. Культура фекалий

          • Метод Бермана для осаждения фекалий
          • Поскольку яйца стронгилов очень похожи, определение вида
            Обнаруженный стронгилидный паразит требует процедуры культивирования и идентификации
            найдены личинки.

          Следующий метод представляет собой способ культивирования яиц нематод
          приказ
          Strongylida к инфекционным личинкам L 3 с последующим выздоровлением
          эти личинки для идентификации. Он включает фазу культивирования, которая
          сводит к минимуму время разработки до L 3 и одного из многих
          модификации метода Бермана для извлечения личинок. В
          Техника Бермана использует тот факт, что L 3 будет
          мигрировать из каловых масс в жидкую среду, но не умеет плавать
          против силы тяжести осядет на дно среднего контейнера.

          Материалы:

          1. Смотровые перчатки и контейнеры для образцов
          2. Весы лабораторные
          3. Сушеный стерильный мох сфагнум («Nodampoff» sphagnum moss is a
            предварительно стерилизованная среда для посева, доступная на лужайках и в саду
            магазины)
          4. Стеклянные стаканы 250 мл
          5. деревянные палочки-аппликаторы
          6. Одноразовые чашки Петри 100 x 25 мм с крышками
          7. Одноразовые чашки Петри 150 x 25 с крышками
          8. марля или марля
          9. резинки
          10. Йодный раствор Люголя
          11. Центрифуга с центрифужными пробирками
          12. Пипетки Пастера
          13. Микроскоп с предметными стеклами и покровными стеклами

          Процедура:

          1. Соберите ректально не менее 10 г фекалий от каждого животного, подлежащего
            проверяется с использованием чистых перчаток и чистых контейнеров для образцов
            (это важно для предотвращения заражения свободноживущими непаразитарными
            нематоды)
          2. Если образец взят от крупного рогатого скота, свиньи или собаки, взвесьте
            минимум 10 г мха сфагнума для каждого исследуемого образца.Место
            мох в подходящей емкости и смешайте с достаточным количеством теплой водопроводной воды, чтобы
            приготовить густой «суп». Дайте мху полностью пропитаться и
            затем отожмите всю лишнюю воду.
          3. Взвесьте 5 г фекалий в стакан емкостью 250 мл и тщательно измельчите
            образец с палочками-аппликаторами
          4. Если образец взят от крупного рогатого скота, свиньи или собаки, добавьте 15 г
            насыщенный мох сфагнум в стакан и тщательно перемешать. Убедись в том, что
            кал не остается на стенках стакана.Лошадь,
            фекалии овец и коз не требуют добавления мха
          5. Поместите смесь фекалий и мха в чашку Петри размером 100 x 25 мм и
            слегка сжать. Частицы материала должны быть однородными.
            контактируют друг с другом, но остаются «пушистыми». Накройте и инкубируйте при
            комнатная температура в течение 14 дней. (Если есть инкубатор, лошадь
            фекалии можно инкубировать в течение 7 дней при 30 ° C.) Не пугайтесь, если
            во время инкубации на образце образуется плесень
          6. После инкубации снимите крышку чашки и поместите 2 слоя.
            марли или марли поверх блюда.Растяните ткань и
            закрепите резинкой. Обрежьте лишнюю ткань и замените крышку.
            Переверните блюдо и резко постучите по дну, чтобы сместить образец на
            ткань.
          7. Поместите 2 деревянных палочки-аппликатора в одноразовый контейнер Петри размером 150 x 25 мм.
            посуду и залить 100 мл теплой водопроводной воды. Хранение чашки Петри диаметром 100 мм
            перевернутым, снимите крышку и положите ее тканевой стороной вниз на
            аппликатор вставляется в чашку Петри диаметром 150 мм. Осторожно нажмите на
            дно 100-мм тарелки до тех пор, пока из-под нее не выйдет небольшое количество воздуха.
            обод, а затем отпустите.Накройте и дайте постоять (Baermannize) в комнате
            температура от 18 до 24 часов.
          8. После берманизации удалите тарелку диаметром 100 мм и деревянную
            аппликатор палочки и выбросить. Добавить 0,3 мл раствора йода Люголя в
            жидкость в чашку диаметром 150 мм и осторожно перемешайте. Вылейте смесь в
            центрифужную пробирку и центрифуги при 1000-1500 об / мин в течение 10 минут. (Если
            центрифуга недоступна, жидкость можно налить в Имхофф
            конус-отстойник или аналогичный контейнер конической формы и выдерживают 10
            минут.
          9. Переместите каплю осадка со дна одной из центрифуг
            пробирки с пипеткой Пастера до микропрепарата. Добавьте покровное стекло и определите
            L 3 личинок, присутствующих под микроскопом.
          10. Описание различных личинок дано в Georgi, Parasitology for
            Ветеринары
            , 6 изд. (1995), Данн, Ветеринарный
            Гельминтология
            , 2 nd изд. (1978), или Левин, нематода
            Паразиты домашних животных и человека
            , (1980)

          Сбор паразитов крови

          1.Метод Кнотта

          Модифицированный метод Узелка используется для концентрирования и идентификации.
          микрофилярий.

          Процедура

          1. Добавьте 1 мл крови к 10 мл 2% формалина и перемешайте.
          2. Центрифуга 5 минут при 1000-1500 об / мин.
          3. Слить надосадочную жидкость. Примечание: трубку можно перевернуть на бумаге.
            полотенце, чтобы дать стечь всей жидкости.
          4. Смешайте осадок с равным объемом водного раствора метиленового синего (1: 1000).
          5. Рассмотреть как мокрое крепление.

          Сбор мышечных паразитов

          1. Приготовление кабачков

          Используется для идентификации цист Trichinella spp в мышцах:

          1. Соберите небольшое количество свежих мышц
            • Выберите ткань либо из жевательной резинки, либо из диафрагмы в качестве этих двух участков.
              дадут положительный результат
          2. Поместите небольшое количество ткани на предметное стекло
          3. Крышка со вторым предметным стеклом
          4. Сожмите два слайда вместе большим и указательным пальцами
          5. Удерживая слайды вместе, склейте оба конца слайдов вместе.
            (для этого подходит скотч)
          6. Обрежьте ткань, не попавшую на два предметных стекла
          7. Изучить под микроскопом с малым увеличением, чтобы определить цисты личинок внутри
            мышца

          Авторское право 1997 г.
          все права защищены.
          Издано Р. М. Корвином и Джули Нахм,
          Колледж ветеринарной медицины Университета Миссури.

          Вернуться в меню методов

          Руководство по микробиологии | Клинические лаборатории UCSF

          Перейдите по этой ссылке, чтобы увидеть обновленный график вирусных изолятов.

          Отправьте запросы на культуру с указанием типа образца, запрошенных процедур и времени сбора. Укажите особые состояния пациента (например, ослабленный иммунитет, трансплантат, муковисцидоз и т. Д.).) и любую противомикробную терапию. Эта информация помогает правильно обработать образец и интерпретировать культуру. За идентификацию и тестирование на чувствительность взимается дополнительная плата.

          часов: культивирование и анализ мазков по Граму производятся круглосуточно, 7 дней в неделю. Предварительные результаты по окрашиванию статограмм из обычно стерильных участков и мазков на малярию выдаются гематологическими отделениями больниц.

          ОБЩЕЕ:

          Большинство образцов, отправленных для посева, должны храниться при комнатной температуре до тех пор, пока посланник не доставит их в лабораторию, однако заморозить мочу и собрать респираторные образцы неинвазивным способом.Не храните в холодильнике посевы крови, мазки в транспортной среде с древесным углем, спинномозговые, суставные и другие обычно стерильные биологические жидкости, ткани или образцы, уже засеянные в чашки или бульон. Такие культуры следует доставить в главные клинические лаборатории для немедленной обработки.

          Пометьте каждый образец, указав имя пациента, номер отделения, источник, дату и время.
          Руководство по сбору микробиологических образцов для операционных UCSF

          ABSCESS: см. РАНУ

          АМИОТИЧЕСКАЯ ЖИДКОСТЬ:

          Сбор: подайте жидкость в стерильную прозрачную пластмассовую верхнюю трубку черного цвета.
          Вирусы: Для ЦМВ и ВПГ отправьте образцы жидкости на тестирование методом ПЦР. При краснухе обратитесь в лабораторию.

          АСИТИЧЕСКАЯ ЖИДКОСТЬ: см. ПЕРИТОНЕАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ

          КРОВИ:

          Бактерии (обычная практика): Выход посевов крови у взрослых зависит от объема и увеличивается примерно на 3% на 1 мл посевной крови; 20% взрослых с бактериемией имеют менее 1 колониеобразующей единицы в 10 мл крови. Около 80% пациентов с положительными посевами крови оказываются положительными при первом взятии проб, 90% обнаруживаются при двух пробах и почти 99% при трех пробах; Оптимальный рутинный посев крови состоит из 2 или 3 наборов аэробных и анаэробных бутылей с 10 мл крови в каждой бутылке.Не собирайте более трех культур крови от одного пациента в течение 24 часов.

          Участки, время сбора и необходимый объем крови

          • Лучше не брать посев крови в течение нескольких часов или дней после введения антибиотиков и, по возможности, избегать сбора образцов из постоянных внутрисосудистых катетеров или шунтов, которые часто имеют внешнее загрязнение, особенно у трехходовых запорных кранов, что затруднительно дезинфицировать.Чтобы избежать разбавления образца введенными жидкостями, отбирайте образцы дистальнее существующих внутривенных линий. Образцы для посева крови не следует отбирать из сосудистой линии, если: (1) не собираются образцы для теста дифференциального времени до положительного результата (DTTP) или (2) это специально не разрешено лечащим врачом. ВНИМАНИЕ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Не следует использовать посев крови для проверки эффективности антибиотикотерапии.
          Специальная бактериальная культура: на Brucella spp. собрать гемокультуры.Сообщите микробиологу о подозрении на этот организм, чтобы культуры можно было инкубировать в течение 14 дней.
          Грибы: дрожжи, такие как Candida spp. и Cryptococcus spp. будет расти в обычных посевах крови и не требует отдельной грибковой культуры. Для культивирования липофильных дрожжей Malassezia и инвазивных плесневых грибов, включая Histoplasma, Fusarium и Scedosporium, также заказывайте Fungal Culture, Blood. Посев на микобактерии: Посев крови на микобактерии непродуктивен, за исключением обнаружения комплекса Mycobacterium avium-intracellulare у ВИЧ-инфицированных пациентов.Заказать AFB Культура, Кровь.
          Посев на микобактерии: Обычный посев крови на микобактерии непродуктивен, за исключением обнаружения комплекса Mycobacterium avium-intracellulare у ВИЧ-инфицированных пациентов. Отправьте две темно-зеленые (не содержащие геля) пробирки с гепарином натрия и укажите, что у пациента ослаблен иммунитет при заказе теста.
          Паразиты, включая малярию: Кровь, отправленная в пробирку с бледно-лиловым верхом, исследуется с помощью окрашивания по Гимзе на паразитов, передающихся с кровью: плазмодий, трипаносома, бабезия, висцеральный лейшмания и микрофилярии.Изучите историю болезни пациента на предмет возможной периодичности и оптимального времени взятия проб.
          Вирусы: ПЦР более чувствительна, чем вирусная культура для идентификации вирусов в образцах крови, и в первую очередь показана пациентам с ослабленным иммунитетом для диагностики виремии. Обнаружение ПЦР в крови чаще всего проводится для CMV, EBV, BK, аденовируса, энтеровируса, HSV и HHV6. Сдайте кровь в пробирку с ЭДТА с лавандовым верхом для тестирования на вирусную ПЦР.

          ЖИДКОСТЬ ДЛЯ КУЗОВА (e.g., сустав, перикард, плевральный; см. также AMNIOTIC, CEREBROSPINAL или PERITONEAL FLUID):

          Сбор: соберите 15–20 мл жидкости в стерильную прозрачную пластиковую верхнюю пробирку черного цвета.

          КОСТНЫЙ МОЗГ:

          Сбор: образцы костного мозга для посева можно собирать независимо или во время диагностической процедуры аспирации костного мозга и биопсии; запланируйте последнее заранее, позвонив в гематолог.
          Хотя культуры костного мозга могут быть полезны для выявления диссеминированных грибковых и микобактериальных заболеваний, они вряд ли помогут в идентификации обычных бактериальных заболеваний.
          Отправьте образец в желтую верхнюю пробирку изолятора объемом 1,5 мл, полученную в отделе гематологии или микробиологии.

          БРОНХОАЛЬНО-ВЕОЛЯРНЫЙ ЛАВАЖ и БИОПСИЯ ЛЕГКИХ:

          Рекомендуемая оценка образцов от пациентов с ослабленным иммунитетом
          Культура / Тест Больные СПИДом Другие пациенты с ослабленным иммунитетом /
          пациентов после трансплантации
          Бактерии (обычные) Обычный заказ Обычный заказ

          Aspergillus

          Заказать если указано Заказать если указано

          Культура грибов с КОН

          Заказывать при подозрении на гистоплазмоз, кокцидиоидомикоз или другие мицелиальные грибы; параллельно исследовать гистологию и посев биопсии Заказать при подозрении на наличие грибов, отличных от дрожжевых и Aspergillus

          Микобактерии

          Приказ, когда М.туберкулез, MAIC или другие микобактерии Заказать при подозрении

          Legionella
          (посев + ПЦР)

          Заказ при подозрении (редко) Обычный заказ

          Вирусов:

          Респираторный Заказать при подозрении Заказать при подозрении

          CMV

          Не указано Количественная ПЦР крови для мониторинга или диагностики.Гистология биоптата может быть полезна при оценке заболевания. Посев на ЦМВ может быть положительным из-за бессимптомного носительства.

          Прочие, включая HSV и VZV

          Заказ ПЦР при указании Заказ ПЦР при указании

          Паразиты

          Цитология Pneumocystis carinii (по анатомической патологии) Заказать при подозрении

          НАКОНЕЧНИК КАТЕТЕРА:

          Сбор: Посев на кончик катетера не производился.Посевы в месте катетера, полученные с помощью мазков, не позволяют прогнозировать катетерную инфекцию, но могут быть полезны для определения возбудителя, когда локализованная инфекция в месте очевидна и можно получить гнойный образец. Наконечники мочевого или перитонеального катетера не подходят для посева; вместо этого отправьте мочу или перитонеальную жидкость.
          Бактерии (стандарт): Посев на кончик катетера больше не проводится. Запросить дифференциальное время до положительного результата посевов крови из периферической вены и внутривенной линии крови, взятых с разницей в 15 минут.Если микроорганизмы растут в образце, взятом через линию, по крайней мере, на два часа раньше, чем в периферической крови, линия считается источником инфекции.
          Грибки: Сообщите в лабораторию, если есть подозрение на инфекцию Malassezia furfur в образцах, взятых у пациентов с перееданием.

          ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ:

          Сбор: отправить в стерильную пробирку для бактериального посева (используйте пробирку, входящую в комплект LP, или стерильную прозрачную пластиковую пробирку с черным верхом.
          Бактерии (обычные): Из-за относительной хрупкости многих распространенных этиологических микроорганизмов при менингите жидкость следует незамедлительно доставить в лабораторию.
          Cryptococcus neoformans: Для диагностики дрожжевого и криптококкового менингита рекомендуются тесты на бактериальную культуру спинномозговой жидкости (дрожжи, включая Cryptococcus neoformans, хорошо растут на обычном бактериальном посеве) и криптококковый антиген в спинномозговой жидкости и сыворотке.
          Coccidioides immitis: Чувствительность культуры спинномозговой жидкости на Coccidiodes immitis ограничена.Серологический анализ сыворотки и / или спинномозговой жидкости на Coccidioides (антитела Coccidioides immitis, иммунодиффузия) более чувствителен, чем посев, и рекомендуются в качестве диагностических тестов первой линии.
          Mycobacteria: CSF будет обработана для культивирования AFB только после консультации с лабораторией. Мазки являются положительными в очень небольшом количестве спинномозговой жидкости с положительным посевом и проводятся только тогда, когда микробиологическая лаборатория получает уведомление о высоком уровне подозрительности. Для посева требуется более 2 мл спинномозговой жидкости.Выход культуры CSF AFB увеличивается с увеличением объема образца. Рекомендуемый объем составляет не менее 6 мл для педиатрии и 15-20 мл для взрослых. Посев на микобактерии прозрачной бесклеточной спинномозговой жидкости непродуктивен, и его не следует заказывать.
          Паразиты (Naegleria, Acanthamoeba, Trypanosoma, Toxoplasma): обратитесь в лабораторию при подозрении на диагноз и немедленно доставьте образец в лабораторию. Посев возможен только в том случае, если пациент не принимает антибиотики.Быстрая диагностика возможна при исследовании пятна Гимзы.
          Вирусы (укажите конкретные искомые агенты):
          Арбовирус: Обратитесь в лабораторию для получения информации о сборе образцов для диагностики энцефалита, передаваемого комарами. Запросы направляются в Лабораторию вирусных и риккетсиозных заболеваний Департамента здравоохранения Калифорнии и должны сопровождаться специальной формой направления, в которой указывается соответствующая история болезни.
          Цитомегаловирус: ПЦР на ЦМВ показана для диагностики причины полирадикулопатии или энцефалита, когда нейтрофильный лейкоцитоз спинномозговой жидкости не объясняется бактериальной инфекцией.
          Энтеровирус: ПЦР на энтеровирус выполняется на спинномозговой жидкости.
          Herpes simplex: ДНК ВПГ с помощью ПЦР проводится на спинномозговой жидкости.
          Varicella-Zoster: вирус VZV иногда вызывает энцефалит у здоровых людей, обычно в сочетании с поражениями кожи, и у ВИЧ-инфицированных пациентов.Пациентам с возможным заболеванием ЦНС предлагается ПЦР и серология ЦСЖ на VZV.

          CERVIX / ENDOCERVIX: см. VAGINA / CERVIX

          КОЛОНИЧЕСКИЕ и ДРУГИЕ КИШЕЧНЫЕ (например, Дуоденальные) АСПИРАТЫ и БИОПСИИ (см. Также ЖЕЛУДОЧНЫЙ АСПИРАТ):

          Сбор: отправляйте образцы аспирата или биопсии в пластиковый стаканчик с плотно закрывающейся крышкой. Ткань должна быть влажной, но не в транспортную среду.

          Паразиты: для Giardia, Strongyloides и других кишечных паразитов доставьте образец в лабораторию в течение 30 минут после сбора с понедельника по пятницу.В отношении лямблиоз обнаружение антигена в кале с помощью EIA более чувствительно и специфично, чем микроскопическое исследование. Проктоскопическое исследование на E. histolytica проводится редко. Перед проведением ректороманоскопии у каждого пациента должна быть проведена серия как минимум из трех стандартных исследований стула на паразитов. Аспират или соскобы из подозрительных поражений толстой кишки могут быть отправлены в фиксаторе SAF с 1 частью образца на 3 части SAF. Перед взятием пробы проконсультируйтесь в лаборатории. Образцы биопсии поражений следует исследовать с помощью обычного гистопатологического исследования.Серология на E. histolytica весьма полезна, особенно при диагностике амебного абсцесса печени.

          Посев на вирус: для CMV и простого герпеса поместите биопсию в UTM (флокированный тампон).

          CONJUNCTIVAE: см. EYE

          ДИАЛИЗНАЯ ЖИДКОСТЬ: см. ПЕРИТОНЕАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ

          ДРЕНАЖ: см. РАНУ

          ГЛАЗ:

          Сбор: соскобы конъюнктивы получают, собирают с помощью тампона и помещают в транспортную пробирку, соответствующую требуемому тесту: транспортная среда для бактериальной культуры, вирусная среда для вирусов и среда UTM для хламидий (полученная от Microbiology).
          Бактерии (стандартная процедура): при отправке посевов из обоих глаз обязательно отметьте, какой образец взят из правого или левого глаза.
          Chlamydia trachomatis: Соскоб конъюнктивы необходим для диагностики хламидийного конъюнктивита.
          Паразиты: отправьте соскобы роговицы на чашку с непитательным агаром для посева Acanthamoeba. Образец лоа-лоа отправьте в отдел анатомической патологии.
          вирусов: отправьте флокированный мазок в UTM.

          желудочные аспираты и биопсии:

          Сбор: Образцы желудочного аспирата следует быстро доставить в лабораторию сразу после сбора и только в период с 06:30 до 19:00 для нейтрализации содержания антибактериальной кислоты.
          Бактерии (стандартный): Образцы желудка будут культивированы на Helicobacter pylori, если это указано. Посев содержимого желудка, возможно, может быть полезным для диагностики неонатального сепсиса; Обычное лабораторное исследование этих образцов включает поиск стрептококков группы B и Listeria monocytogenes, а также менее распространенных патогенов.Посевы крови и околоплодных вод более чувствительны и более специфичны для диагностики стрептококковой инфекции группы B, чем посев желудочного аспирата.
          Микобактерии: Посев содержимого желудка обычно менее продуктивен, чем посев мокроты или других респираторных культур. Первый утренний желудочный аспират наиболее полезен для диагностики туберкулеза, когда пациент не может выделять мокроту.

          СОЕДИНИТЕЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ: см. КУЗОВА

          ОБРАЗЦОВ НАСОФАРИНГЕЛЯ:

          Флокированный тампон в универсальной транспортной среде — это основной метод сбора образцов из носоглотки для тестирования на респираторные вирусы и ПЦР Bordetella pertussis.
          НАЗОФАРИНГЕАЛЬНЫЙ МАТЧИК (СЛОЖЕННЫЙ МАТЧИК):
          Сбор: Для сбора используйте флокированный тампон / универсальную транспортную среду. Вставьте тампон в ноздрю, осторожно вращая тампон внутрь до тех пор, пока сопротивление не будет встречено на уровне носовых раковин. Поверните тампон несколько раз относительно стенки носоглотки (примерно 10 секунд), а затем возьмите тампон. Поместите тампон в контейнер с универсальной транспортной средой. Разломайте конец тампона, чтобы можно было надежно прикрутить верхнюю часть флакона.Обозначьте образец соответствующим образом и отправьте в лабораторию.
          Респираторные вирусы: мазки из носоглотки в универсальной транспортной среде являются предпочтительным типом образцов для тестирования на респираторные вирусы.
          НАСАЛЬНЫЙ АСПИРАТ или ПРОМЫВКА:
          Сбор: Образцы для ПЦР на вирусы или Bordetella pertussis следует собирать в течение 5–7 дней после начала заболевания, предпочтительно в первые 4 дня.Образцы, собранные через 7 дней, редко обнаруживают патогены.
          Назальный аспират:
          1. Взрослые и дети старшего возраста: удобно расположить пациента в сидячем положении, шея слегка вытянута вверх
          2. Младенцы и дети младшего возраста: сядьте на колени родителей лицом вперед, спиной к груди родителей. Родитель должен обнять ребенка одной рукой так, чтобы удерживать его тело и руки.
          3. Новорожденные: плотно пеленайте для комфорта
          4. Для взрослых, детей и младенцев:
            1. Присоедините один конец отсасывающего катетера к ловушке для слизи (оба можно получить в отделе материаловедения)
            2. Присоедините другой конец к настенной вытяжке.НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ аспирацию через рот.
            3. Включите всасывание и отрегулируйте давление вакуума до 40-60 мм рт. При извлечении катетера из носоглотки используйте большой палец для отсасывания.
            4. Слегка вытянув голову пациента, закапайте 1-2 мл стерильного физиологического раствора в ноздрю пациента.
            5. Осторожно проденьте трубку через внешнюю ноздрю в нософарник. ПРИМЕЧАНИЕ: глубина введения, необходимая для достижения задней части глотки, эквивалентна расстоянию между наружной ноздрей и наружным отверстием уха.
            6. Выполните аспирацию и, используя вращательное движение, аспирируйте материал при извлечении трубки под давлением 40-60 мм рт. ПРИМЕЧАНИЕ: катетер должен оставаться в носоглотке не более 10 секунд.
            7. При необходимости наберите материал в ловушку для образцов, используя стерильный физиологический раствор. Держите ловушку для образцов вертикально, чтобы секреты не попали во всасывающую трубку.
            8. Повторяйте процедуру до получения подходящего образца (2 мл).
            9. При необходимости предложите пациенту салфетки.
            10. Отсоединить и выключить всасывающее устройство. Свяжите трубку или закройте слизистую ловушку крышкой, находящейся на дне ловушки.
          Промывание носа:
          1. Взрослые и дети старшего возраста: Расположите пациента в удобном сидячем положении, слегка вытянув шею
            1. Перед процедурой попросите пациента высморкаться.
            2. С помощью стерильного шприца введите 3 мл стерильного физиологического раствора в одну ноздрю
            3. Если возможно, попросите пациента подержать физиологический раствор в течение нескольких секунд.
            4. Поместите контейнер с образцом прямо под носом, слегка надавив на верхнюю губу.
            5. Наклоните головку вперед и дайте жидкости стечь в контейнер с образцом.
            6. Повторите процедуру для другой ноздри, собрав жидкость в тот же контейнер.
            7. Предложите пациенту салфетки.
          2. Младенцы и дети младшего возраста: сядьте на колени родителей лицом вперед, спиной к груди родителей. Родитель должен обнять ребенка одной рукой так, чтобы удерживать его тело и руки.
            1. Наполните шприц с грушей 1–3 мл стерильного физиологического раствора, в зависимости от размера пациента, и закапайте физиологический раствор в одну ноздрю, наклонив голову назад.
            2. Ослабьте давление на колбу, чтобы аспирировать образец обратно в колбу.
            3. Перенесите образец в контейнер для образцов.
            4. Повторите процедуру для другой ноздри, перенеся второй образец в тот же контейнер для образцов.
            5. Предложите салфетки по мере необходимости.

          ПЕРИКАРДИАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ: см. КУЗОВНАЯ ЖИДКОСТЬ

          ПЕРИТОНЕАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ (включая абдоминальную, асцитическую и диализную жидкость):

          Бактерии (стандартная процедура): сначала внесите по 10 мл в каждую из бутылей для аэробных и анаэробных культур крови у постели пациента для оптимального роста и восстановления организмов.Если получено <20 мл, разделите жидкость поровну между бутылями. Дополнительная жидкость может подаваться в стерильную пробирку, что позволяет выполнить окрашивание по Граму и быстрее идентифицировать бактерии, присутствующие в высоких концентрациях. Включает культуры для выделения аэробных и анаэробных бактерий, а также Candida.
          Другие организмы: поместите жидкость в стерильную пробирку. Закажите «Посев других грибов с пятном КОН», если рассматривается гистоплазмоз, и / или посев на микобактерии, если туберкулез брюшины является диагностическим соображением.

          ПЛЕВРАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ: см. ТЕЛО ЖИДКОСТЬ

          PUS (см. Также РАНЕНИЕ):

          Сбор: отправить в стерильную прозрачную пластиковую черную пробирку. Образец ткани предпочтительнее образца гноя, но гной — лучший образец, чем мазки, помещенные в транспортную среду.

          ПРЯМОЙ:

          Neisseria gonorrhoeae и Chlamydia trachomatis:
          Обнаружение нуклеиновых кислот — чувствительный метод диагностики CT / NG-инфекций, рекомендуемый для большинства пациентов.
          Инструкции по взятию образцов ДНК CT / NG
          Посев на Chlamydia trachomatis обычно показан для оценки неэффективности клинического лечения, когда ДНК может сохраняться после лечения. Для посева требуется транспортировка ткани или мазка в специальной среде UTM, которую можно получить в лаборатории микробиологии.
          Культура Neisseria gonorrhoeae обычно показана для оценки неэффективности клинического лечения и для получения изолята для тестирования чувствительности.Для посева требуется мазок в транспортной среде Эми с углем.

          МАТЕРИАЛ И ТРАХЕСТВЕННЫЙ АСПИРАТ:

          Сбор: Образцы собирают прямым отхаркиванием в чистую пластиковую чашку с непротекающей крышкой (достаточно чистой нестерильной емкости). Индукция мокроты, если необходимо, должна быть организована с помощью респираторной терапии, обычно за день до сбора. Могут быть представлены ловушки Люкена. Если возможно, пациенту следует промыть ротовую полость свежей водой, прежде чем пытаться откашливать образец мокроты.
          Бактерии (стандартный метод): окрашивание по Граму проводится по прибытии в лабораторию. Образцы, демонстрирующие большое количество плоскоклеточных клеток как свидетельство контаминации глотки, не будут обрабатываться в дальнейшем, а отправителю будет предложено предоставить новый, должным образом собранный образец.
          Грибы: При подозрении закажите посев на Aspergillus. Candida spp. часто загрязняют дыхательные пути и оцениваются только у пациентов с трансплантацией легких и у других пациентов, у которых обнаружено их большое количество и в чистой культуре.При подозрении на системную инфекцию Histoplasma, Coccidioides, Blastomyces или возбудителями мукормикоза следует заказать «Посев на грибок». Образцы, собранные с помощью более инвазивных процедур, таких как бронхиальный лаваж, лучше подходят для обнаружения этих организмов. Укажите подозреваемых агентов в поле «Предупреждение / инструкции» при заказе теста в Apex. КОН обычно включается в культуру грибов.
          Микобактерии: соберите 3 отдельных образца мокроты с 8–12-часовыми интервалами, включая как минимум один образец ранним утром. Образцы мокроты, собранные с интервалом менее 8 часов, объединяют и тестируют как один образец.
          Паразиты: направьте образцы на Pneumocystis carinii в цитологию. Для других паразитов укажите искомый организм при заказе теста.
          Вирусы: SPUTUM не является подходящим образцом.
          Простой герпес: поскольку ВПГ часто выводится бессимптомно, мокрота является плохим образцом для диагностики пневмонита, вызванного ВПГ.См. Выше бронхоальвеолярный лаваж.
          Респираторные вирусы: Для аспиратов трахеи можно заказать ПЦР с панелью респираторных вирусов.

          КОЖА (см. Также РАНУ):

          Сбор: ткань, полученная при биопсии, часто является лучшим образцом для диагностики кожных инфекций, но аспирированный или дренированный гной, везикулярная жидкость или соскобы кожи могут быть полезны для диагностики некоторых инфекций.
          Бактерии (обычные): При рожистом воспалении, импетиго и целлюлите мазки, взятые с поверхностно покрытых коркой и мокнущих поражений, если они есть, должны быть помещены в транспортную среду.Аспирация иглой центра или края пораженной области имеет ограниченную полезность при этих инфекциях. При паронихии, язве, фолликулите и карбункулах следует сдать аспирированный гной или, что менее желательно, провести гнойный дренаж на тампоне в транспортной среде.
          Грибки: При изъязвлении и / или узловых грибковых инфекциях кожи (споротрихоз, бластомикоз или инфекции, вызванные Cryptococcus spp.), Отправьте биопсию кожи с края поражения параллельно с образцом, представленным в дерматопатолог для гистологического исследования.Заказ «Культура грибов с пятном КОН». При поверхностных микозах (например, Candida, Epidermophyton, Trichophyton или Microsporum spp.) Отправьте соскоб с кожи, волос или ногтей в чистую пробирку и закажите «Культура грибов, дерматофиты с грибковым пятном KOH». В качестве альтернативы можно взять образцы, собранные в дерматологической клинике. быть засеянным непосредственно на микобиотический агар и отправлено в лабораторию только для культивирования с заказом «Грибковая культура, дерматофиты (дерматологическая клиника)».
          Микобактерии и Nocardia spp.: При язвенных и / или узелковых поражениях кожи, вызванных кислотоустойчивыми микроорганизмами (например, Mycobacterium marinum, Nocardia asteroides), отправьте биопсию кожи на микобактериальную культуру параллельно с образцом, представленным в дерматопатологию для гистологического исследования.
          Паразиты: для Leishmania spp. Мазки аспиратов или сенсорных препаратов окрашиваются Гимзой и исследуются под микроскопом. Для диагностики филяриальной (онхоцеркальной) инфекции можно исследовать влажные образцы среза кожи с ягодиц, икр или области над лопаткой; этот тест бесполезен для диагностики кожных мигрирующих личинок.Ткани должны быть отправлены в дерматопатологию для гистологического исследования на паразитов.
          Вирусов:
          Простой герпес: чтобы получить образец для культивирования, снимите везикулу и соберите жидкое содержимое и базальный клеточный слой с помощью хлопкового тампона. Поместите тампон в универсальную транспортную среду (UTM). Сушеные корки от старых поражений не подходят. Тампоны с деревянными стержнями могут содержать токсичные для вируса соединения. Чтобы получить образец, подходящий для прямого исследования с флуоресцентными антителами, соскоблите основание открытой везикулы стерильным лезвием скальпеля и перенесите полученные клетки на два чистых предметных стекла, оставив на каждом предметном стекле по два пятна, каждое примерно по 1.5 см. в диаметре (размером с десять центов). Дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе и отправьте их на окрашивание. См. Также ветряную оспу ниже.
          Ветряная оспа: прямой анализ на антигены — наиболее эффективный способ обнаружения. Чтобы получить образец, подходящий для прямого исследования с флуоресцентными антителами, соскоблите основание открытой везикулы стерильным лезвием скальпеля и перенесите полученные клетки на два чистых предметных стекла, оставив на каждом предметном стекле по два пятна, каждое примерно по 1. 5 см. в диаметре (размером с десять центов). Дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе и отправьте их на окрашивание.

          ТАРЕЛКА:

          Сбор: Соберите свежий образец в чистый пластиковый стаканчик с непротекающей крышкой (нестерильный контейнер подойдет). Доставить в лабораторию менее чем за 1 час. Амбулаторные пациенты должны получить инструкции и контейнеры в лаборатории или на станциях амбулаторной флеботомии. Для образцов, требующих консерванта, метод консервации описан ниже с описанием испытания.
          Бактерии (обычные): Свежий стул должен быть получен в микробиологическую лабораторию в течение 3 часов после сбора. Восстановление Shigella, вероятно, улучшится, если образец будет доставлен в лабораторию в течение 15 минут после сбора. Доступны флаконы, содержащие транспортную среду Кэри-Блера для бактериального посева образцов стула, которые нельзя доставить в лабораторию в течение 3 часов после прохождения. Заполняйте эти емкости только до красной линии. Образцы стула дают лучшие показатели восстановления кишечных патогенов, чем ректальные мазки.Двух образцов, собранных с интервалом 24-48 часов, достаточно для выявления подавляющего большинства случаев; большее количество образцов требует консультации с лабораторией. Мазки следует сдавать в консерванте Кэри-Блэра.
          Нозокомиальное заражение возбудителями стула крайне редко. При подозрении на бактериальный энтерит следует запросить посев кала при поступлении в больницу; они не будут приниматься в плановом порядке пациентам, которые были госпитализированы более 3 дней.За исключениями обращайтесь в лабораторию.
          Образцы обычно культивируют на Salmonella, Shigella, Campylobacter spp. и E. coli O157, и проверены на токсин шига. Aeromonas, Edwardsiella и Plesiomonas также можно извлечь из обычного посева стула. Если есть подозрение на наличие иерсиний или вибрионов (Vibrio cholerae или V. parahaemolyticus), закажите посев на эти возбудители отдельно.
          Токсин Clostridium difficile: свежий стул. Бессимптомное носительство является обычным явлением, поэтому обследование следует проводить только пациентам с симптомами.Отправляйте табуреты ТОЛЬКО от пациентов с диареей (> = 3 несформированных стула за <= 24 часа, стул должен соответствовать форме контейнера). У пациентов с кишечной непроходимостью можно взять мазок из прямой кишки - укажите «кишечную непроходимость» в поле для комментариев при заказе теста. Повторные тесты в течение 1 недели без разрешения микробиологической лаборатории не допускаются. Тестирование на пациентах младше 1 года требует одобрения Детской инфекционной службы.
          Фекальные лейкоциты: выберите образец диарейного стула с помощью палочки-аппликатора, включая кровянистые или слизистые выделения, если они есть.Поскольку лейкоциты лизируются в старых образцах, образец следует доставить в лабораторию в течение 3 часов после сбора. Этому тесту не хватает чувствительности и специфичности для диагностики причины внутрибольничной диареи, и он проводится только у амбулаторных пациентов и у пациентов <72 часов после госпитализации.
          Жировые шарики, качественный мазок для: Отправьте несохраненный стул. Этот тест полезен только для пациентов старше 6 месяцев.
          Грибки: Тест не предлагается.
          Mycobacteria: Тест не предлагается.
          Паразиты («O&P»): соберите 3 образца (не более одного за 24-48 часов), чтобы повысить вероятность положительного результата. Свежий стул необходимо получить в микробиологическую лабораторию в течение 1 часа после сбора. В качестве альтернативы отправляйте стул во флаконах с фиксатором SAF (ацетат натрия-уксусная кислота-формалин). Следуйте инструкциям, прилагаемым к флаконам. Заполняйте только красную линию. Пациенты не должны получать противомикробную терапию или контрастное вещество с барием в течение как минимум 7 дней до сбора образца.
          Cryptosporidium: Обычное обследование яиц и паразитов включает скрининговый тест на Cryptosporidium. Если обычное обследование O&P отрицательно на Cryptosporidium и есть подозрение на инфекцию, закажите обследование на кокцидии, которое позволит выявить небольшое количество микроорганизмов.
          Giardia lamblia: свежий стул или стул с фиксатором SAF. Тест на антиген предпочтительнее исследования на яйца и паразиты, если лямблии являются единственным кишечным паразитом при дифференциальной диагностике.Внутрибольничное заражение паразитами встречается даже реже, чем внутрибольничный шигеллез. Если есть подозрение на паразитарный энтерит, при поступлении в больницу следует запросить O&P обследование; они не будут приниматься в плановом порядке пациентам, которые были госпитализированы более 3 дней. За исключениями обращайтесь в лабораторию.
          Microsporidium: заказывается отдельно от обычного осмотра на яйца и паразиты.
          Острица: соберите 3 лопаточки за 3 утра подряд.Соберите каждый образец ПЕРЕД дефекацией или купанием. Лопатки для забора крови можно приобрести в амбулаторных пунктах для флеботомии или в лаборатории. Если этих лопаток нет в наличии, для сбора можно использовать прозрачный прозрачный скотч (не Magic Mending) и наклеить липкой стороной вниз на чистое предметное стекло микроскопа.
          Вирусы: Возбудители вирусного гастроэнтерита, как правило, не культивируются, включая аденовирус 40 и 41, агент Норуолк и ротавирус.
          Энтеровирус: ПЦР на энтеровирусы используется только для определения причины асептического менингита и / или вирусного сепсиса новорожденных.Отправляйте свежий неконсервированный стул в стерильную емкость.
          Антиген ротавируса: Тест на антиген ротавируса с помощью EIA доступен для диагностики диарейных заболеваний у педиатрических пациентов. Отправляйте свежий стул в пластиковый стаканчик. Повторное тестирование можно проводить каждые 7 дней.

          ГОРЛО:

          Бактерии (стандартная процедура): Отправьте дакроновый тампон в бумажной обертке. Если не требуется поиск определенного организма или диагноза (например,g., дифтерия, гонорея, молочница), посевы из горла обычно обрабатываются только для исключения возможности стрептококкового фарингита группы А.
          Neisseria gonorrhoeae и Chlamydia trachomatis:
          Обнаружение нуклеиновых кислот — чувствительный метод диагностики CT / NG-инфекций, рекомендуемый для большинства пациентов.
          Инструкции по взятию образцов ДНК CT / NG
          Посев на Chlamydia trachomatis обычно показан для оценки неэффективности клинического лечения, когда ДНК может сохраняться после лечения.Для посева требуется транспортировка ткани или мазка в специальной среде UTM, которую можно получить в лаборатории микробиологии.
          Культура Neisseria gonorrhoeae обычно показана для оценки неэффективности клинического лечения и для получения изолята для тестирования чувствительности. Для посева требуется мазок в транспортной среде Эми с углем.
          Грибки: см. Бактерии (обычное дело) — укажите диагноз возможной молочницы.
          Вирусы: См. ОБРАЗЦЫ НАСОФАРИНГЕЛЯ для получения информации о надлежащем отборе образцов на респираторные вирусы.

          ТКАНИ (см. Также РАНА):

          Отправить в транспортном флаконе для анаэробов (доступен в операционных и в микробиологическом отделении) или в стерильном контейнере, если он слишком большой, чтобы поместиться в транспортный флакон для анаэробов. Не помещайте салфетку в транспортную среду Amies с углем

          ТРАХЕАЛЬНЫЙ АСПИРАТ: см. МАТЕРИАЛ

          УРЕТРА:

          Сбор: протрите уретру начисто и предпочтительно собирайте образец через> 1 час после мочеиспускания
          Бактерии: «Молочите» уретру и собирайте выделения.Если выделений нет, введите тампон на 2–4 см в уретру и вращайте в течение 15–30 секунд. Поместите тампон для сбора в транспортную среду Amies, содержащую древесный уголь, и отправьте его в лабораторию в течение 6 часов после сбора.
          Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis и Trichomonas vaginalis:
          Обнаружение нуклеиновых кислот — чувствительный метод диагностики CT / NG и инфекций Trhichomonas vaginalis, рекомендуемый для большинства пациентов.
          Инструкции по взятию образцов РНК CT / NG и Trichomonas vaginalis
          Посев на Chlamydia trachomatis обычно показан для оценки неэффективности клинического лечения, когда ДНК может сохраняться после лечения. Для посева требуется транспортировка ткани или мазка в специальной среде UTM, которую можно получить в лаборатории микробиологии.
          Культура Neisseria gonorrhoeae обычно показана для оценки неэффективности клинического лечения и для получения изолята для тестирования чувствительности.Для посева требуется мазок в транспортной среде Эми с углем.

          МОЧИ:

          Сбор: Культура должна быть незамедлительно охлаждена и не должна находиться у постели пациента при комнатной температуре.

          1. Чистая моча для посева собирается в чистый, сухой пластиковый стаканчик с непротекающей крышкой (нестерильные емкости подходят):
            1. женщин:
              1. Попросить пациента:
                1. Вымойте руки водой с мылом
                2. Раздвинув половые губы, промойте всю область стерильной очищающей салфеткой из комплекта поставки; протирание спереди назад.
                3. Продолжайте раздвигать половые губы и начните мочиться прямо в унитаз.
                4. На полпути установите контейнер, а затем начните мочиться в контейнер. Не прикасайтесь контейнером к области гениталий
                5. Стакан наполнять не обязательно, достаточно наполовину.
                6. Попросите пациента вернуть образец в указанное место.
              2. Кобели:
                1. Попросить пациента:
                  1. Вымойте руки водой с мылом
                  2. Оттяните крайнюю плоть, если имеется
                  3. Полностью промойте головку полового члена («головку» полового члена) с помощью прилагаемой стерильной очищающей салфетки.
                  4. Начало мочеиспускания прямо в унитаз
                  5. Во время приготовления пара установите емкость, затем начните мочиться в емкость. Не прикасайтесь контейнером к области гениталий
                  6. Стакан наполнять не обязательно, достаточно наполовину.
                  7. Вернуть образец в указанное место.
            2. Постоянный катетер мочу собирают путем аспирации мочи через порт катетера с помощью стерильной вакуумной трубки с красной пробкой («простая, стерильная»).В качестве альтернативы, мочу можно собрать с помощью иглы и шприца и перенести в вакуумную трубку с красной пробкой (открыть верхнюю часть вакуумной трубки; нет необходимости проходить через резиновую диафрагму с помощью иглы). Не отправляйте мочу, полученную из длинной дренажной трубки или мешка для сбора.
            3. Первый сбор мочи сразу после введения катетера считается «прямой катетеризацией мочи». Мочу с прямого катетера собирают с помощью наборов для сбора катетера. Мочу помещают в чашку с завинчивающейся крышкой.
            4. Посевы на кончике катетера Фолея не подходят для диагностики инфекции мочевыводящих путей и не принимаются для обработки.
          Бактерии (стандартная процедура): Количественный посев проводится на всех образцах мочи. Окрашивание по Граму выполняется только по запросу. Одной культуры достаточно в клинической ситуации, требующей быстрого начала терапии. Нет необходимости сдавать повторные образцы ежедневно или с другими частыми интервалами.
          Сообщения о смеси генитальной флоры с другими организмами в количестве> 1000 колониеобразующих единиц (КОЕ) / мл будут сопровождаться пометкой, такой как «Присутствует смешанная флора.Предложите воспоминание при наличии клинических показаний ». Смешанная флора обычно не идентифицируется, если образец не был должным образом взят из катетера или нефростомической трубки. Если культура дает один организм, этот организм будет идентифицирован. Если присутствуют два или более микроорганизма, они будут идентифицированы в соответствии с алгоритмом, который учитывает клинические условия и общее количество бактерий в моче. Тесты на чувствительность обычно выполняются только в том случае, если в середине потока мочи обнаружено> 10 000 КОЕ / мл или если в образцах, полученных с помощью катетера, присутствует> 1000 КОЕ / мл. , дренирование уретеростомы или нефростомы.Врач, желающий провести с образцом другую процедуру, должен обратиться в лабораторию.
          Скрининговая культура: скрининговую культуру можно запросить, нажав кнопки «Пропустить идентификатор» и «Пропустить восприимчивость» в поле «Предупреждения / инструкции» при заказе посева мочи в Apex. Это менее дорогостоящая количественная культура, для которой идентификация видов и тестирование на восприимчивость будут проводиться (за дополнительную плату) только по специальному запросу после публикации результатов.Чашки с положительными скрининговыми культурами сохраняют в течение 7 дней. Этот тест особенно подходит для скрининга детей, беременных женщин, молодых женщин с первыми инфекциями мочевых путей, а также пациентов, которым проводят дренирование через катетер Фолея.
          Грибы: закажите бактериальный посев при подозрении на инфекцию мочевыводящих путей, вызванную дрожжами. При подозрении на инфекцию другими грибковыми возбудителями проконсультируйтесь с лабораторией перед сдачей мочи.
          Микобактерии: лучший образец мочи — это первая утренняя моча, то есть примерно 8-часовой образец, содержащийся в условиях, обычно свободных от других бактерий.Посев мочи в течение 24 часов не проводится, поскольку чрезмерный рост загрязняющих веществ является частой причиной неудачных попыток посева мочи. Образцы должны быть собраны методом «чистых мочеиспусканий» (см. Выше). Поскольку туберкулез мочевыводящих путей крайне редко встречается в популяции наших пациентов, посев мочи на микобактерии требует консультации с лабораторией. Посевы обычно ограничиваются пациентами с положительными PPD, у которых обнаружена необъяснимая пиурия с отрицательными стандартными бактериальными культурами.Посев мочи не следует использовать для выявления случаев туберкулеза легких. Окрашивание мочи на КУБ обычно не проводится, поскольку моча редко бывает положительной, а непатогенные микобактерии, которые морфологически сходны с M. tuberculosis, часто присутствуют в мочеполовых путях.
          Паразиты: Мочу, собранную и объединенную между 1000 и 14 часами, можно исследовать на наличие Schistosoma haematobium и (редко) микрофилярий.
          Вирусов:
          ЦМВ: Посев мочи на ЦМВ подходит только для новорожденных до 3 недель, чтобы попытаться зарегистрировать врожденную инфекцию, в отличие от инфекции, приобретенной во время родов, которая становится положительной через 3-4 недели после родов.Моча от пациентов старше 3 недель требует одобрения Службы инфекционных заболеваний или начальника отдела.
          Аденовирус, вирус BK (паповавирус), эпидемический паротит, корь, краснуха: запросы на корь и краснуху требуют консультации с Департаментом общественного здравоохранения СФ. Закажите тест ДНК вируса BK Количественная ПЦР на вирус BK, который более чувствителен, чем культура.

          VAGINA / CERVIX:

          Сбор: используйте зеркало без лубриканта (лубрикант может быть токсичным для интересующих клеток и микроорганизмов).Очистите шейку матки от выделений из влагалища и слизи.
          Бактерии: Соберите эндоцервикальный экссудат на дакроновый тампон вращательным движением. Поместите тампон в транспортную среду Amies, содержащую древесный уголь, и отправьте его в лабораторию в течение 6 часов после сбора.
          Если указан посев на потенциальные патогены, отличные от Neisseria gonorrhoeae, закажите бактериальный посев и окраску по Граму, гениталии и, если возможно, укажите, какие потенциальные патогены вызывают озабоченность.Потенциальные патогены включают бета-гемолитические стрептококки, Staphlococcus aureus, большое количество дрожжевых грибов и грамотрицательных палочек, виды Haemophilus и т. Д.
          Вагинально-ректальные культуры беременных женщин на стрептококки группы B должны быть заказаны как Streptococcus Group B Culture .
          Бактериальный вагиноз / вагинит: закажите мазок из влагалища на бактериальный вагиноз / дрожжи и отправьте тонкие мазки влагалищных выделений на 2 предметных стекла или возьмите мазок в транспортной среде Эми с углем.Микроскопическое исследование мазка вагинального секрета, окрашенного по Граму, может выявить как «ключевые» клетки, соответствующие диагнозу бактериального вагиноза, так и дрожжевые грибки.
          Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis и Trichomonas vaginalis:
          Обнаружение нуклеиновых кислот — чувствительный метод диагностики инфекций CT / NG и Trichomonas vaginalis, рекомендуемый для большинства пациентов.
          Инструкции по взятию образцов РНК CT / NG и Trichomonas vaginalis
          Посев на Chlamydia trachomatis обычно показан для оценки неэффективности клинического лечения, когда ДНК может сохраняться после лечения.Для посева требуется транспортировка ткани или мазка в специальной среде UTM, которую можно получить в лаборатории микробиологии.
          Культура Neisseria gonorrhoeae обычно показана для оценки неэффективности клинического лечения и для получения изолята для тестирования чувствительности. Для посева требуется мазок в транспортной среде Эми с углем.
          Простой герпес: чтобы получить образец для посева, осторожно очистите поверхность неповрежденного полового пузырька физиологическим раствором.Снимите крышу с пузырьков и соберите жидкое содержимое и слой базальных клеток с помощью хлопкового тампона. Поместите тампон в универсальную транспортную среду (UTM). Тампоны с деревянными стержнями могут содержать токсичные для вируса соединения. Чтобы получить образец, подходящий для прямого исследования с флуоресцентными антителами, соскоблите основание открытой везикулы стерильным лезвием скальпеля и перенесите полученные клетки на два чистых предметных стекла, оставив на каждом предметном стекле по два пятна, каждое примерно по 1,5 см. в диаметре (размером с десять центов).Дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе и отправьте их на окрашивание.
          Стрептококк группы B: для оптимальной чувствительности получите селективную бульонную среду от Microbiology. Возьмите мазки из нижней части влагалища и прямой кишки и отправьте мазки в среду в лабораторию. В качестве альтернативы отправьте мазки в транспортную среду Amies, содержащую древесный уголь.
          Trichomonas vaginalis: отправьте мазок APTIMA из влагалища или шейки матки, см. Инструкции по взятию образцов ДНК CT / NG.
          Дрожжи: см. Бактериальный вагиноз выше.Влагалищный мазок на бактериальный вагиноз / дрожжевые грибки легко обнаруживает клинически активную вагинальную дрожжевую инфекцию. Как правило, в культуре нет необходимости, если только не требуется изоляция организма для тестирования чувствительности в случае неэффективности лечения.

          РАНА (включая абсцесс и дренаж; см. Также КОЖА и ТКАНИ):

          Сбор: образец ткани предпочтительнее образца гноя, но гной лучше мазков, взятых в транспортной среде.
          Отправьте ткань в транспортном флаконе для анаэробов (имеется в операционных и в отделениях микробиологии) или в стерильном контейнере, если он слишком велик для того, чтобы поместиться в транспортный флакон для анаэробов.Не помещайте ткань в транспортную среду Amies с углем. Слейте жидкость в стерильную прозрачную пластиковую черную пробирку. Если нет ни тканей, ни гноя, ни жидкости, отправьте по крайней мере два дакроновых мазка в транспортной среде Amies с древесным углем.
          Бактерии (стандартные): Включает процедуры по выделению аэробных и анаэробных бактерий. Анаэробные культуры могут быть выполнены только из мазков, если мазки помещены в транспортную среду Эми с углем. Анаэробные посевы не проводятся на образцах, таких как мазки от фурункулов, мазок с катетера, целлюлит, пролежни, пустулы / гной, кожа, швы, язвы (но не из операционной) и кончики перитонеальных шунтов.
          Грибы:
          Candida и Aspergillus: Культуры на эти патогены следует специально запрашивать при подозрении на их присутствие в абсцессах и поверхностных ранах. Ткани и жидкости из обычно стерильных участков автоматически исследуются на наличие дрожжей и аспергилл.
          Другие виды: При подозрении на наличие других грибов, образующих мицелий, оптимальным образцом является биопсия пораженной ткани.Посевы проводятся 30 дней. Мазки являются неприемлемыми образцами для культивирования мицелий-образующих организмов, особенно организмов, вызывающих мукормикоз, потому что они часто не позволяют выявить патоген, обнаруженный в биоптатах и ​​выращенный на них.
          Микобактерии: посев из раны на микобактерии указывается нечасто и не проводится из мазков. Если Nocardia spp. подозреваются, закажите культуру AFB и укажите «Ищите Nocardia».
          Паразиты: см. Кожу
          Вирусы: запросить тестирование на конкретные вирусы, представляющие клинический интерес.Ткани из инфицированных областей следует собирать в асептических условиях и перевозить в лабораторию в универсальной транспортной среде (UTM).
          Цитомегаловирус: Ткани можно культивировать на ЦМВ, но трудно провести различие между выделением ЦМВ (носительство) и активным заболеванием.

          Сообщается обо всех организмах, присутствующих в обычно стерильных материалах, независимо от того, могут ли они быть контаминантами.О видах, которые, как известно, часто являются патогенными, можно сообщать из обычно нестерильных районов; однако, когда они присутствуют в небольшом количестве, они не обязательно являются клинически значимыми. Нормальная флора представлена ​​в следующей таблице

          .

          ОРГАНИЗМЫ, СООТВЕТСТВУЮЩИЕ НОРМАЛЬНОЙ ФЛОРЕ

          Культуры желудочно-кишечного тракта и прямой кишки

          • различные грамотрицательные бактерии, кроме видов Salmonella, Shigella, Campylobacter, Aeromonas, Yersinia, Edwardsiella и Vibrio
          • грамотрицательные палочки, не ферментирующие декстрозу, энтерококки
          • энтерококки
          • Эпидермальный стафилококк
          • альфа-гемолитические и негемолитические стрептококки
          • дифтероидов
          • Золотистый стафилококк в небольших количествах
          • дрожжи в небольших количествах
          • анаэробы в большом количестве

          Генитальные культуры

          • Любая из следующих сумм:
          1. Виды Corynebacterium
          2. Виды Lactobacillus
          3. альфа-гемолитические и негемолитические стрептококки
          4. непатогенных видов Neisseria
          • Следующие ниже смешанные, но не преобладающие:
          1. Энтерококки
          2. Enterobacteriaceae и другие грамотрицательные палочки
          3. Эпидермальный стафилококк
          4. Золотистый стафилококк
          5. Gardnerella vaginalis
          6. Виды Candida и другие дрожжи
          7. Анаэробы (слишком много видов, чтобы перечислить)

          Ороназальные (оральные, назальные и глоточные) культуры

          • Любая из следующих сумм:
          1. Виды Corynebacterium
          2. непатогенных видов Neisseria
          3. альфа-гемолитические и негемолитические стрептококки
          4. Эпидермальный стафилококк
          5. анаэробов (слишком много видов, чтобы перечислить; различное количество видов Prevotella, анаэробных кокков, видов Fusobacterium и т. Д.)
          • Меньшие количества следующего, когда они сопровождаются вышеуказанным:
          1. дрожжи
          2. Виды Haemophilus
          3. пневмококки
          4. Золотистый стафилококк
          5. грамотрицательных стержней
          6. Neisseria meningitidis

          Культуры кожи

          • Эпидермальный стафилококк
          • Золотистый стафилококк (в небольшом количестве)
          • видов микрококков
          • непатогенная Neisseria
          • альфа-гемолитические и негемолитические стрептококки
          • Виды Propionibacterium
          • небольшое количество других организмов (например,g., виды Candida или Acinetobacter)

          Тестирование чувствительности выполняется методом разбавления микротитровального бульона, а в особых случаях — методом дисковой диффузии [Бауэра-Кирби]. Формы тестирования чувствительности и отчетов предоставляют как числовые, так и интерпретирующие отчеты о минимальной ингибирующей концентрации (МИК) каждого тестируемого препарата. МИК, самая низкая концентрация лекарственного средства, подавляющего рост организма in vitro, указывается в мг / л (мкг / мл).

          Используются различные батареи лекарств. В таблицах на следующих страницах указаны препараты, указанные для конкретных типов организмов. Система постоянно корректируется в соответствии с новой информацией и текущими потребностями. Тестирование на чувствительность к другим лекарствам не проводится без консультации со службой инфекционных заболеваний или аптекой по инфекционным заболеваниям.

          Тесты на чувствительность будут регулярно проводиться для любого организма, признанного лабораторией потенциально значимым, если тест не был проведен на том же организме в течение 7 дней (4 дня для устойчивых к нафциллину Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Citrobacter, Enterobacter и Serratia spp.). Чашки со значительными культурами хранятся в лаборатории в течение 7 дней после выпуска окончательного отчета. Таким образом, можно получить уязвимости после получения отчета.

          Совместно с Комитетом по фармации и терапии и Службой инфекционных заболеваний отдел микробиологии клинических лабораторий разработал иерархическую схему отчетности о результатах тестов на чувствительность к противомикробным препаратам. Целью условной отчетности является сокращение использования более дорогостоящих или токсичных противомикробных препаратов в тех случаях, когда они не нужны, и, таким образом, снижение огромных затрат на использование противомикробных препаратов в UCSF.

          Результаты по чувствительности будут представлены для панели первичных лекарств, состоящей из стандартных, менее дорогих (часто генерических) и менее токсичных агентов. Если организмы устойчивы к этим основным лекарствам, будут сообщены дополнительные результаты для более дорогих, потенциально более токсичных лекарств второго выбора. Эта процедура соответствует общим принципам, установленным Институтом клинических и лабораторных стандартов, и рекомендована Консультативным подкомитетом UCSF по антибиотикам Комитета по фармации и терапии.

          Таблицы лекарств были разработаны для стафилококков, стрептококков, энтерококков, энтеробактерий, синегнойной палочки и других организмов и учитывают, получены ли изоляты из мочи или из других мест. Всегда указываются первичные препараты; О вторичных препаратах сообщают только в том случае, если обнаружена резистентность к конкретному первичному препарату. Эти панели и вторичные препараты, о которых сообщается условно, описаны ниже:

          Стафилококк (кроме S. saprophyticus)

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Клиндамицин (подавлен в моче и спинномозговой жидкости; подавлен в S.Epidermidis, если эритромицин-R и клиндамицин-S или -I)
          Эритромицин (подавленный в моче и спинномозговой жидкости)
          Нафциллин, отчет о резистентности:
          Для чувствительных к нафциллину изолятов нафциллин или цефазолин являются препаратами выбора.
          Ванкомицин
          Пенициллин (Если не сообщается, но рассматривается возможность лечения, обратитесь в отдел микробиологии.)
          Тетрациклин (подавлен в спинномозговой жидкости и крови)
          Триметоприм-сульфаметоксазол (подавлен в крови)

          Staphylococcus saprophyticus

          Регулярно не тестировался.Добавлено примечание: инфекции мочевыводящих путей, вызванные этим организмом, реагируют на противомикробные препараты, такие как нитрофурантоин, ТМП SMZ или фторхинолон в концентрациях, достигаемых в моче у пациентов с нормальной функцией почек. Обратитесь в лабораторию для тестирования чувствительности в случае неэффективности лечения или аллергии.

          Энтерококк

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Ампициллин
          Ципрофлоксацин (только моча)
          Гентамицин, высокий уровень (подавляется в моче)
          Нитрофурантоин (только моча)
          Тетрациклин (только моча)
          Ванкомицин, отчет о резистентности: Тетрациклин (только нестерильные участки)
          Даптомицин (зарегистрировано по VRE из стерильных участков, кроме CSF)
          Линезолид (зарегистрировано по VRE из стерильных участков, включая CSF)

          Стрептококки групп A, C и G

          Первичные препараты
          Клиндамицин
          Эритромицин
          Пенициллин

          Стрептококк группы B (проводится для пациентов с акушерством при аллергии на пенициллин)

          Первичные препараты
          Клиндамицин

          Стрептококк группы B (стерильные участки)

          Регулярно не тестировался.Добавлено примечание: (Этот вид универсально восприимчив к пенициллину. Тест на чувствительность показан только для пациентов с аллергией.)

          Viridans Streptococcus

          Первичные препараты
          Цефотаксим
          цефтриаксон
          Клиндамицин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Эритромицин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Левофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Пенициллин
          Ванкомицин

          Streptococcus pneumoniae

          сайтов, отличных от крови и спинномозговой жидкости) и выделить из нестерильных участков с пониженной чувствительностью к пенициллину:
          Первичные препараты Вторичные препараты
          Цефотаксим
          Цефтриаксон, отчет о промежуточной или резистентности: Меропенем
          Клиндамицин
          Эритромицин
          Левофлоксацин
          Пенициллин
          Тетрациклин
          Триметоприм-сульфаметоксазол
          Ванкомицин
          Кровь или CSF:
          Первичные препараты Вторичные препараты
          Цефотаксим
          Цефтриаксон, отчет о промежуточной или резистентности: Меропенем
          Пенициллин
          Ванкомицин

          Коринебактерии

          Восприимчивости выполняются по запросу.

          Neisseria meningitidis

          Чувствительность определяют на изолятах из стерильных центров.
          Сообщается о следующих препаратах для профилактики контактных лиц с менингококковой инфекцией, но не для лечения пациентов с инвазивным менингококковым заболеванием:
          Первичные препараты
          Азитромицин
          Ципрофлоксацин
          Миноциклин
          Рифампицин

          Haemophilus influenzae

          Восприимчивости выполняются по запросу.

          Сальмонелла

          Критерии определения чувствительности изолятов кала:

          • младенцы <6 месяцев
          • Salmonella typhi, S. paratyphi A, S. choleraesuis

          Первичные препараты

          Вторичные препараты

          Ампициллин (подавлен в спинномозговой жидкости), если отчет о промежуточной или резистентности:

          Ампициллин-сульбактам (подавлен в CSF)

          Цефтриаксон (подавляется при стуле, за исключением Salmonella typhi, S.paratyphi A, S. choleraesuis

          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Ципрофлоксацин (подавлен CSF)

          Левофлоксацин (подавлен CSF)

          Шигелла / Plesiomonas / Edwardsiella tarda

          Первичные препараты

          Вторичные препараты

          Ампициллин (подавлен в спинномозговой жидкости), если отчет о промежуточной или резистентности:

          Ампициллин-сульбактам (подавлен в CSF)

          Цефтриаксон (подавляется при стуле)

          Ципрофлоксацин (подавлен CSF)

          Левофлоксацин (подавлен CSF)

          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Аэромонас

          Первичные препараты

          Цефтриаксон (подавляется при стуле)

          Ципрофлоксацин (подавлен CSF)

          Левофлоксацин (подавлен CSF)

          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Холерный вибрион

          Первичные препараты

          Ампициллин

          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Тетрациклин

          Vibrio spp., а не V. cholerae

          Первичные препараты

          Вторичные препараты

          Ампициллин (подавлен в спинномозговой жидкости), если отчет о промежуточной или резистентности:

          Ампициллин-сульбактам (подавлен в CSF)

          Цефтазидим (подавляется при стуле)

          Ципрофлоксацин (подавлен CSF)

          Левофлоксацин (подавлен CSF)

          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Тетрациклин

          Campylobacter

          Препарат сообщается только при наличии устойчивости

          Первичные препараты

          Ципрофлоксацин

          Эритромицин

          Enterobacteriaceae, кроме Salmonella, Shigella, Plesiomonas и Edwardsiella tarda

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Ампициллин-сульбактам (подавлен на CSF и Enterobacter spp.) Ампициллин-сульбактам (подавлен на CSF и Enterobacter spp.)
          Цефазолин (подавленный в ЦСЖ)
          Цефепим (только Enterobacter spp.)
          Цефтриаксон (подавлен на Enterobacter spp.), Отчет о промежуточной или резистентности: Цефепим и Эртапенем
          Если указывается Эртапенем-I или R, меропенем
          Ципрофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Эртапенем (подавлен в спинномозговой жидкости; Enterobacter spp.только), если отчет промежуточный или стойкий: Меропенем
          Гентамицин
          Левофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Нитрофурантоин (только моча)
          Пиперациллин-тазобактам (подавлен на CSF и Enterobacter spp. Со всех участков, кроме мочи)
          Тобрамицин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Синегнойная палочка

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Азтреонам (подавлен, если цефтазидим I или R)
          Цефтазидим, отчет о промежуточной или резистентности: Цефепим и меропенем
          Ципрофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Левофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Пиперациллин-тазобактам (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Тобрамицин, отчет о резистентности: Амикацин

          Stenotrophomonas maltophilia

          Изоляция этого организма из нестерильных участков может представлять собой колонизацию.По вопросам лекарственной чувствительности обратитесь в микробиологическую лабораторию. Для получения рекомендаций по эмпирической терапии обратитесь в аптеку ID. Восприимчивость обычно определяется на стерильных участках и у пациентов с муковисцидозом:
          Первичные препараты
          цефтазидим
          Миноциклин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Acinetobacter spp.

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Ампициллин-сульбактам (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Цефтриаксон, отчет о промежуточной или резистентности: Цефепим и меропенем
          Ципрофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Гентамицин
          Левофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Пиперациллин-тазобактам (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Тобрамицин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Неферментеры глюкозы, не S.maltophilia, Acinetobacter spp. и B. cepacia

          Первичные препараты Вторичные препараты
          Азтреонам (подавлен, если цефтазидим I или R)
          Цефтазидим, отчет о промежуточной или резистентности: Цефепим и меропенем
          Ципрофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Гентамицин
          Левофлоксацин (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Пиперациллин-тазобактам (подавлен в спинномозговой жидкости)
          Тобрамицин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Burkholderia cepacia

          Первичные препараты
          цефтазидим
          Меропенем
          Миноциклин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Campylobacter

          Препарат сообщается только при наличии устойчивости

          Нокардия

          Первичные препараты
          Амикацин
          Цефотаксим
          цефтриаксон
          Ципрофлоксацин
          Имипенем
          Миноциклин
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Быстрорастущие микобактерии

          Первичные препараты
          Амикацин
          Cefoxitin
          Ципрофлоксацин
          Кларитромицин
          Доксициклин
          Тобрамицин (сообщается только в том случае, если M.челоны)
          Триметоприм-сульфаметоксазол

          Если подходящий первичный или вторичный препарат недоступен, по запросу может быть проведено тестирование на соответствующие дополнительные противомикробные агенты. Проконсультируйтесь в лаборатории.

          Результаты восприимчивости интерпретируются с использованием рекомендаций CLSI, основанных на значениях MIC или размерах зон Кирби-Бауэра. Интерпретация результатов теста на чувствительность определяется следующим образом:

          S- Чувствительный: организм подавляется антимикробным препаратом в концентрации, легко достигаемой в крови и моче при обычных дозировках.

          I- Промежуточный (или неопределенный): Для достижения ингибирующей концентрации в сыворотке могут потребоваться более высокие дозы противомикробного препарата, чем обычно. Интерпретация I для антипсевдомонадных пенициллинов предполагает только то, что препарат не следует использовать как отдельный агент, а следует применять в сочетании с аминогликозидом.

          R-Resistant: Противомикробный препарат не подавляет организм даже в концентрациях, достижимых в сыворотке или моче при использовании высоких доз.

          Текущую информацию о совокупном проценте обычно изолированных видов бактерий, чувствительных к определенному уровню противомикробных препаратов, и о количестве штаммов в базе данных UCSF можно найти на сайте http: // Clinicalpharmacy.ucsf.edu/idmp/antibiogram_home.htm. Данные включают изоляты как внебольничных, так и внутрибольничных инфекций, которые соответствуют лабораторным критериям потенциальной клинической значимости (например, моча> = 100 000 / мл, изоляты из обычно стерильных участков, таких как кровь, преобладающие организмы из раны и т. Д.) . Однако не все бактерии однозначно представляют собой клинически значимые инфекции (например, S. epidermidis).

          Синдромы и возможные
          Вирусные агенты

          Носоглотка *

          Горло

          Табурет

          CSF

          Моча

          Другое

          Респираторный синдром
          Вирус гриппа A, B

          +++ (ПЦР)

          Парагрипп

          ++ (ПЦР)

          Респираторно-синцитиальный вирус

          ++++ (ПЦР)

          Аденовирус

          ++ (ПЦР)

          Риновирус

          +++ (ПЦР)

          Метапневмовирус

          ++ (ПЦР)

          Корона (вкл.SARS)

          ++ (ПЦР)

          Дерматологические заболевания и заболевание слизистых оболочек
          Везикулярный
          Простой герпес

          везикула (C, FA) +++

          Ветряная оспа

          везикула (FA) ++++

          Энтеровирус (синдром кисти, стопы и рта)

          везикула (ПЦР) ++

          Экзантематический
          Энтеровирус

          плазма (ПЦР) +++

          Корь

          +++ (C, ПЦР)

          ++ (C, ПЦР)

          кровь (S) +++

          Краснуха

          +++ (ПЦР)

          +++ (ПЦР)

          кровь +++

          Менингоэнцефалит
          Арбовирус (например,Западный Нил)

          +++ (ПЦР)

          кровь (S) +++

          Энтеровирус

          +++ (ПЦР)

          Простой герпес

          +++ (ПЦР)

          VZV

          ++ (ПЦР, S)

          Желудочно-кишечный
          Ротавирус

          ++ (Ag, ПЦР)

          Норовирусы

          ++ (ПЦР, Ag)

          кровь (S)

          Врожденные и перинатальные
          Цитомегаловирус

          ++++ (К)

          Энтеровирус

          кровь (ПЦР) +++

          Вирус простого герпеса

          ++ (К)

          ++ (ПЦР)

          везикула (FA, C) ++++

          ЦМВ-инфекция
          Цитомегаловирус (CMV)

          ++++ (К)

          кровь (ПЦР) +++
          ткань (H) ++

          Гепатит (A-E)

          кровь (S, ПЦР) ++++

          Гепатиты B и C

          кровь (S, ПЦР) +++

          СПИД
          ВИЧ

          кровь (S) ++++
          (ПЦР) ++++

          Миокардит, перикардит и плевродиния
          Коксаки В

          перикардиальная жидкость (ПЦР) +

          Ag = обнаружение антигена
          bDNA = разветвленная ДНК
          C = культура
          FA = флуоресцентное антитело
          H = гистология
          ПЦР = полимеразная цепная реакция
          S = серология
          ++++ = вероятность положительности

          Процедура окрашивания по Граму и ее роль в C&S

          Использование / клиническое применение

          1.Окрашивание по Граму является единственной наиболее полезной процедурой окрашивания для быстрой предполагаемой идентификации бактерий с клинической точки зрения в качестве основы предварительного отчета для C&S

          .

          2. Предлагает возможную идентификацию на основе реакции грамма, морфологии и расположения. Грамотрицательные диплококки (neisseria). Грамположительные кокки (стафилококки). Грамотрицательная палочка (e.coli, psuedomonas). Вы не можете сказать e. coli, кроме pseudomonas, но, возможно, нет необходимости в назначении лечения, поскольку известно, что некоторые антибиотики эффективны против грамотрицательных бактерий.

          3. Если заказывается окрашивание по грамму STAT, это может занять 30-40 минут вместо 12-24 часов.

          4. Предоставляет предварительные данные о восприимчивости к антибиотикам для лечения. Если после введения антибиотика бактерии остались, значит, он не сработал.

          5. Предлагает среды, условия инкубации для роста и выделения бактерий из клинических образцов. Например, если у вас есть рана от укуса, которая предполагает наличие анаэробных бактерий, нужно ли вам сообщить лаборатории, что вы подозреваете анаэробные бактерии? да.Потому что, если вы настроите его аэробно, результаты будут бессмысленными. Клинические лаборатории обычно имеют стандартные рабочие процедуры для устранения этих проблем и максимального восстановления. Когда вы берете культуру крови, вы берете две культуры: анаэробную и аэробную.

          6. Может объяснить невозможность получения жизнеспособных организмов в культуре возможной из-за несоответствующей питательной среды и / или условий инкубации: анаэробы инкубируются в аэробных условиях.

          Преимущества: быстрый, экономичный, потенциально спасающий жизнь.

          Процедура окрашивания по Граму

          • Приготовьте мазок с образца, высушите на воздухе, зафиксируйте нагреванием.

          • Добавьте кристально-фиолетовый (фиолетовый), подождите 30 секунд.

          • Промыть водой.

          • Добавьте йод (Йод — протрава; протрава позволяет кристаллическому фиолетовому прилипать к клеточной стенке грамположительных бактерий. Подождите минутку.

          • Обесцвечивать спиртом, пока предметное стекло не станет прозрачным.

          • Промыть водой.

          • Обработайте пятно сафранином (красным) и подождите 30 секунд.

          • Промыть водой.

          • Промокните, просушите, исследуйте

          Грамположительные бактерии содержат много пептидогликана (который является частью бактериальной клетки) и плотный / плотный матрикс для сохранения первичного окрашивания. Если вы посмотрите на страницу 85 своего учебника, вы увидите 3 типа клеточных стенок. Кристаллический фиолетовый будет удерживаться толстой плотной матрицей внутри пептидогликана. Когда вы добавляете спирт, краситель остается, потому что он прочно связан с клеточной стенкой из-за толстой матрицы.Представьте, что у вас есть кусок сети, представьте, что это всего лишь один слой, несколько слоев сети. Представьте, что вы заливаете песок через многосеточный слой, песок останется из-за всего пептидогликана. Если матрица рыхлая, первичный краситель не сохраняется. Вы добавляете йод, который увеличивает способность красителя притягиваться к клеточной стенке.

          Когда вы добавляете спирт, первичный кристаллический фиолетовый краситель вымывается у грамотрицательных бактерий, но остается у грамположительных бактерий.На этом этапе грамположительные бактерии будут фиолетовыми, а грамотрицательные — бесцветными.

          Когда вы добавляете сафранин (красный краситель), что происходит с грамположительными? Он останется пурпурным, но грамм-негатив станет красным. Таким образом, вы получаете грамм-отрицательный розовый / красный или грамположительный фиолетовый. (Это показано на странице 59.)

          Роль красителя по Граму в C&S

          Окраска по Граму используется в качестве основы для лечения и потенциально может спасти жизнь тяжелобольным пациентам с менингитом или сепсисом.Клиницист не может дождаться полного обследования C&S (3-5 дней), чтобы вылечить человека с септическим шоком. Окрашивание по Граму может быть выполнено за 30 минут или обычно в течение 2-4 часов. Пятно по Граму является частью набора данных о критических значениях и называется критическим, потому что оно имеет решающее / важное / потенциально жизненно важное значение.

          Роль кислотостойких красителей в C&S

          Относительно немного бактерий являются кислотоустойчивыми бактериями, но они могут быть полезны в качестве основы для туберкулеза или проказы.Два рода AFB — это актиномицеты и микобактерии. Безусловно, наиболее распространенным родом являются микобактерии, наиболее распространенными бактериями являются M. tuberculosis, а вторым — M. leprae. Есть и другие, такие как M. Avium intracellulare, M. chelonae и yadda yadda yadda.

          AFB окрашивает красный цвет, но это другая процедура, чем граммовая окраска, поэтому она не имеет ничего общего с этим красным. У AFB есть грамположительные клеточные стенки, поэтому они окрашиваются в красный (а не в фиолетовый) цвет, потому что это другая процедура.Вы не стали бы делать окрашивание по Граму на КУБ (например, если вы подозреваете, что у кого-то туберкулез), потому что, если бы вы сделали окрашивание по Граму, бактерии были бы грамположительными и не сказали бы вам, что это туберкулез (или КУБ). Кислотостойкое окрашивание обеспечивает более точный диагноз, поскольку оно нацелено на все микобактерии. Наличие одного единственного AFB в мокроте или ткани подтверждает диагноз в большинстве случаев туберкулеза.

          Окрашивание по

          Грамм, кислотоустойчивое окрашивание бацилл, окрашивание спор и окрашивание капсул — The Science Notes

          «Пятно» — это химический реагент или краситель, вызывающий обесцвечивание образца.Такое использование красителя для добавления контраста для лучшего обзора микроскопического изображения, дающего отчетливое представление о организме, называется окрашиванием

          .

          — методика, которая широко используется для исследования клеток, тканей и клеточных компонентов.

          Подготовка мазка

          Целью мазка является фиксация бактерий на предметном стекле и предотвращение потери образца во время процедуры окрашивания. Мазок можно приготовить на твердой или бульонной среде. Ниже приведены некоторые рекомендации по приготовлению мазка:

          1.Возьмите чистый, обезжиренный предметный столик и пометьте его (обычно на левом предметном стекле)

          .

          2. Поместите небольшую часть изолированной колонии (из твердой среды) или петлю с жидкой бактериальной культурой в центр предметного стекла.

          3. В случае твердой культуры добавьте полную петлю дистиллированной воды и, используя стерильную петлю, распределите смесь, покрывая примерно половину общей площади предметного стекла.

          4. Воздух — высушите мазок и после надлежащего высыхания предметное стекло готово к окрашиванию.

          Виды окрашивания

          1. Простое окрашивание:

          — Окрашивание микроорганизмов путем нанесения одного красителя на фиксированный мазок.

          — Покрывает фиксированный мазок пятном на определенный период, после чего раствор смывается водой и предметное стекло промокается насухо.

          — Часто используются основные красители, такие как кристаллический фиолетовый, метиленовый синий или карбол фуксин

          — делается для определения размера, формы и расположения бактерий

          2.Дифференциальное окрашивание:

          — немного более сложный, чем простые методы окрашивания, поскольку клетки могут подвергаться воздействию более чем одного красителя или пятен. Например.

          A. Окрашивание по Граму

          — Этот метод был введен в 1884 году датским врачом Кристианом Грамом

          — Окрашивание по Граму — это распространенный метод, используемый для дифференциации двух больших групп бактерий на основе их различных компонентов клеточной стенки. Процедура окрашивания по Граму различает грамположительные и грамотрицательные группы путем окрашивания этих клеток в красный или фиолетовый цвет.

          Принцип:

          Более высокое количество липидов во внешней мембране клеточной стенки G-ve легко растворяется спиртом, что приводит к образованию большой поры в клеточной стенке, что способствует утечке кристаллического фиолетового йода (CV-I). комплекс, в результате чего бактериальная клетка обесцвечивается. Которые позже принимают контрастное пятно (сафранин) и становятся красными. Напротив, клеточная стенка бактерий G + ve толстая и химически простая. При обработке спиртом он вызывает обезвоживание и закрытие пор клеточной стенки, тем самым не позволяя потерять комплекс (CV-I), и клетки остаются пурпурными.

          Шагов:

          и. термофиксированный мазок заливают кристаллическим фиолетовым основным красителем (первичное пятно) и через 1 мин слегка смывают водопроводной водой.

          ii. затем к мазку добавляют раствор йода и снова через 1 мин смывают косвенно в течение 2 сек водопроводной водой.

          iii. Затем мазок обесцвечивается промыванием этанолом (15 секунд). (На этом этапе создается дифференциальный аспект окраски по Граму. Грамположительные бактерии сохраняют кристаллический фиолетовый цвет, а грамотрицательные становятся бесцветными.)

          iv. наконец, мазок окрашивают в течение 1 мин простым основным красителем, отличным по цвету от кристаллического фиолетового. Сафранин — наиболее распространенное средство для пятен

          v. Промойте предметное стекло водопроводной водой через 1 мин и держите его на сливной решетке до высыхания

          vi. наблюдать под микроскопом при 10-кратном, 40-кратном, а затем при 100-кратном увеличении под масляной иммерсией (с каплей масла на вершине мазка)

          B. Кислотно-быстрое окрашивание бацилл (AFB)

          — впервые разработано Ziehl, а затем модифицировано Neelsen, так называемый метод окрашивания Ziehl-Neelsen.

          — основная цель — разделение бактерий на кислотоустойчивые (не обесцвеченные кислотой) и некислотные группы; особенно представители рода Mycobacterium (M. tuberculosis) устойчивы и могут быть визуализированы только путем кислотостойкого окрашивания.

          Принцип:

          Когда мазок окрашивается карбол-фуксином, он солюбилизирует липоидный материал, присутствующий в клеточной стенке микобактерий, но под действием тепла карбол-фуксин далее проникает через липоидальную стенку и попадает в цитоплазму.После этого ячейка становится красной. Затем мазок обесцвечивается обесцвечивающим агентом (3% HCl в 95% спирте), но кислотоустойчивые клетки устойчивы из-за наличия большого количества липоидного материала в их клеточной стенке, что препятствует проникновению обесцвечивающего раствора. У некислотно-быстрых организмов отсутствует липоидный материал в клеточной стенке, из-за чего они легко обесцвечиваются, оставляя клетки бесцветными. Затем мазок окрашивают контрастным красителем, метиленовым синим. Только обесцвеченные клетки поглощают контрастное пятно, приобретают его цвет и становятся синими, в то время как кислотоустойчивые клетки сохраняют красный цвет.

          Шагов:

          1. Приготовьте бактериальный мазок (используя небольшую бамбуковую палочку) на чистом и обезжиренном предметном стекле, используя стерильную технику.
          2. Дайте мазку высохнуть на воздухе, а затем закрепите его нагреванием.
            Спиртофиксация (5% фенол в этаноле): рекомендуется, если мазок не был приготовлен из мокроты, обработанной гипохлоритом натрия (отбеливателем), и не будет сразу окрашиваться. M. tuberculosis убивает отбеливатель. Термофиксация необработанной мокроты не убивает M. tuberculosis, тогда как фиксация спиртом является бактерицидной.
          3. Покройте мазок красителем карбол-фуксин.
          4. Нагрейте пятно до тех пор, пока не начнет подниматься пар (т.е. примерно 60 90 489 • 90 490 ° C). Не перегревайте. Оставьте нагретое пятно на предметном стекле в течение 5 минут.
          5. Смойте пятно чистой водой.
          6. Покройте мазок кислотным спиртом 3% об. / Об. На 5 минут или пока мазок не станет достаточно обесцвеченным, т. Е. Бледно-розовым.
            Осторожно: Кислый спирт легко воспламеняется, поэтому используйте его с осторожностью вдали от открытого огня.
          7. Хорошо промыть чистой водой.
          8. Покройте мазок малахитовым зеленым пятном на 1-2 минуты, используя большее время, когда мазок тонкий.
          9. Смойте пятно чистой водой.